振荡电场刺激联合神经干细胞移植促进大鼠脊髓损伤后神经功能恢复

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目的:证实振荡电场刺激(oscillating field stimulation,OFS)调节在体移植的神经干细胞(neural stem cell,NSC)定向分化和促进脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后神经功能恢复的作用,并为研究其机制提供理论参考,以求为临床上修复SCI提供新的技术方向。方法:采用随机分组的方式将Sprague Dawley(SD)大鼠分入脊髓损伤组、单纯移植组和联合治疗组三组,分别构建相应的大鼠模型;以BBB大鼠运动功能评分(Basso-Beattie-Bresnahan,BBB)的结果评估大鼠SCI后神经功能恢复情况;利用蛋白质印迹法(Western Blot,WB)、冰冻切片和组织免疫荧光染色(Immunofluorescence,IF)的方法,观察在OFS作用下大鼠损伤脊髓内移植的NSC增殖和分化情况;采用WB和IF的方法检测大鼠SCI后轴突的受损及再生情况。结果:1.在术后第3到5周时,联合治疗组大鼠在各时间点的平均BBB评分均高于单纯移植组大鼠,差异具有统计学意义(P<0.05);2.WB结果表明术后第3天时,联合治疗组的大鼠脊髓组织中绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)平均表达水平高于单纯移植组,且差异具有统计学意义(P<0.05);3.IF结果显示在术后第3、7和14天时,联合治疗组大鼠脊髓组织切片中呈GFP/β-Tubulin III阳性细胞的平均数量均高于单纯移植组,且差异具有统计学意义(P<0.05);4.IF结果显示在术后第3、7和14天时,联合治疗组大鼠脊髓组织切片中呈GFP/NG2阳性细胞的平均数量均高于单纯移植组,且差异具有统计学意义(P<0.05);5.IF结果显示术后第7和14天时,联合治疗组大鼠脊髓组织切片中呈GFP/S100β阳性细胞的平均数量均低于单纯移植组,且差异具有统计学意义(P<0.05);6.WB结果表明在术后第14天时,联合治疗组的大鼠脊髓组织中神经丝蛋白(neurofilament200,NF-H)平均表达水平高于单纯移植组,且差异具有统计学意义(P<0.05),IF结果显示在术后第14天时,联合治疗组中NF-H染色阳性面积所占比例明显大于单纯移植组,且差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:OFS能够调节大鼠在体移植的NSC定向分化,促进神经元的再生、神经的再髓鞘化及轴突的再生,减少星形胶质瘢痕的形成。相比单纯移植NSC的方式,联合治疗更有助于SCI后大鼠的神经功能恢复。
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