目的:本研究以人肺泡上皮细胞（Human pulmonary alveolar epithelial cells,HPAEpiC）为研究对象,在建立高氧诱导的人肺泡上皮细胞（HPAEpiC）损伤模型基础上,观察白藜芦醇（resveratrol,Res or R）、SIRT1激动剂SRT1720 HCl（S）及SIRT1抑制剂Selisistat（EX-527,E）对高氧所致人肺泡上皮细胞线粒体功能障碍及细胞凋亡的影响,探讨白藜芦醇是否可以通过SIRT1/PGC-1α信号通路发挥其抗凋亡作用,为白藜芦醇应用于高氧肺损伤的临床治疗提供实验依据。方法:1.细胞培养:将人肺泡上皮细胞置于10%胎牛血清、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的高糖DMEM（High Glucose Dulbecco’s modified Eagle’s medium,DMEM）培养基,于37℃、5%CO₂饱和湿度培养箱中进行培养。2.实验分组:根据CCK-8（cell counting kit-8,CCK8）结果及相关文献,取对数生长期的人肺上皮细胞（HPAEpiC）分为以下八组,（1）对照组（Control）;（2）高氧组（Hyperoxia）;（3）高氧+白藜芦醇组（H+R20）;（4）高氧+白藜芦醇+5μM EX-527组（H+R20+E5）;（5）高氧+白藜芦醇+10μM EX-527组（H+R20+E10）;（6）高氧+SRT1720组（H+S2）;（7）高氧+SRT1720+5μM EX-527组（H+S2+E5）;（8）高氧+SRT1720+10μM EX-527组（H+S2+E10）。对照组:将HPAEpiC细胞置于高糖DMEM完全培养基中,直接于37℃、5%CO₂饱和湿度培养箱中培养。高氧组:加入相同培养基后进行高氧处理,即以3L/min的速度通入高纯混合气体（950ml/L O₂和50ml/L CO₂）10min,随后与对照组同等条件下培养。高氧+白藜芦醇组:加入含白藜芦醇20μM的完全培养基,培养2h后予以高氧处理,随后与对照组同等条件下培养。高氧+白藜芦醇+5μM EX-527组:加入含EX-527 5μM的完全培养基,预处理30min后,加入含白藜芦醇20μM的完全培养基,再培养2h后予以高氧处理,随后与对照组同等条件下培养。高氧+白藜芦醇+10μM EX-527组:加入含EX-527 10μM的完全培养基,预处理30min后,加入含白藜芦醇20μM的完全培养基,再培养2h后予以高氧处理,随后与对照组同等条件下培养。高氧+SRT1720组:加入含SRT17202μM的完全培养基,培养2h后予以高氧处理,随后与对照组同等条件下培养。高氧+SRT1720+5μM EX-527组:加入含EX-527 5μM的完全培养基,预处理30min后,加入含SRT1720 2μM的完全培养基,再培养2h予以高氧处理,随后与对照组同等条件下培养。高氧+SRT1720+10μM EX-527组:加入含EX-527 10μM的完全培养基,预处理30min后,加入含SRT1720 2μM的完全培养基,再培养2h后予以高氧处理,随后与对照组同等条件下培养。各组细胞均置于相同条件下培养24h,然后收集各组细胞进行下一步检测。3.细胞总活性氧检测:高氧处理培养24h后,收集各组细胞,采用活性氧试剂盒（Reactive Oxygen Species Assay Kit,也称ROS Assay Kit）检测各组细胞总活性氧情况。4.细胞线粒体活性氧检测:高氧处理培养24h后,采用Mito SOX?检测各组细胞线粒体活性氧情况。5.线粒体膜电位检测:高氧处理培养24h后,采用JC-1染色检测各组细胞线粒体膜电位情况。6.细胞凋亡:高氧处理培养24h后,收集各组细胞,采用流式细胞仪检测各组凋亡情况。7.Western Blot:高氧处理培养24h后,提取各组细胞总蛋白,检测各组细胞中SIRT1、Ac-p53、PGC-1α、NRF1、TFAM蛋白相对表达情况。结果:1.白藜芦醇以剂量依赖方式抑制HPAEpiC细胞生长,当白藜芦醇浓度大于20μM时,对HPAEpiC细胞生长有明显抑制作用（P<0.001）;SRT1720以剂量依赖方式抑制HPAEpiC细胞增殖,当SRT1720浓度大于1μM时,对HPAEpiC细胞生长有明显抑制作用（P<0.05）;EX-527以剂量依赖方式抑制HPAEpiC细胞生长,当EX-527浓度大于2.5μM时,对HPAEpiC细胞生长有明显抑制作用（P<0.05）。2.细胞总活性氧结果显示:与对照组相比,高氧组细胞总活性氧明显增加（P<0.001）;与高氧组相比较,高氧+白藜芦醇组细胞总活性氧明显下降（P<0.001）;而用EX-527预处理后的高氧+白藜芦醇+5μM EX-527组和高氧+白藜芦醇+10μM EX-527组细胞总活性氧较高氧+白藜芦醇组明显增加（P<0.001）。SRT1720与白藜芦醇有相似的结果。3.细胞线粒体活性氧结果显示:与对照组相比,高氧组细胞线粒体活性氧明显增加（P<0.001）;与高氧组相比较,高氧+白藜芦醇组细胞线粒体活性氧明显下降（P<0.001）;而用EX-527预处理后的高氧+白藜芦醇+5μM EX-527组和高氧+白藜芦醇+10μM EX-527组细胞线粒体活性氧较高氧+白藜芦醇组明显增加（P<0.001）。SRT1720与白藜芦醇有相似的结果。4.细胞线粒体膜电位结果显示:与对照组相比,高氧组细胞线粒体膜电位明显下降（P<0.001）;与高氧组相比较,高氧+白藜芦醇组细胞线粒体膜电位明显增加（P<0.001）;而高氧+白藜芦醇+5μM EX-527组和高氧+白藜芦醇+10μM EX-527组细胞线粒体膜电位较高氧+白藜芦醇组明显降低（P<0.001）。SRT1720与白藜芦醇有相似的结果。5.流式细胞凋亡结果显示:与对照组相比较,高氧组细胞凋亡率明显增加（P<0.001）;高氧+白藜芦醇组细胞凋亡率较高氧组明显下降（P<0.001）;而高氧+白藜芦醇+5μM EX-527组和高氧+白藜芦醇+10μM EX-527组细胞凋亡率较高氧+白藜芦醇组明显增加（P<0.001）;SRT1720与白藜芦醇有相似的结果。6.Western Blot结果显示:与对照组相比,高氧组SIRT1、PGC-1α、NRF1、TFAM蛋白表达明显下降（P<0.05）,Ac-p53蛋白表达明显增加（P<0.05）;与高氧组比较,高氧+白藜芦醇组SIRT1、PGC-1α、NRF1、TFAM蛋白表达明显增加（P<0.05）,Ac-p53蛋白表达明显下降（P<0.05）;与高氧+白藜芦醇组相比较,高氧+白藜芦醇+5μM EX-527组和高氧+白藜芦醇+10μM EX-527组SIRT1、PGC-1α、NRF1、TFAM蛋白表达下降（P<0.05）,Ac-p53蛋白表达明显增加（P<0.05）。SRT1720与白藜芦醇有相似的结果。结论:1.白藜芦醇减轻高氧诱导的线粒体功能障碍和细胞凋亡。2.白藜芦醇可能通过SIRT1/PGC-1α信号通路在高氧诱导的人肺泡上皮细胞损伤中发挥保护作用。