黑牛肝茵(Boletus aereus)学名枣铜色牛肝菌,属于牛肝菌科,牛肝菌属。其通体呈黑色,味道鲜美,在我国四川、云南、贵州等地广泛分布,在欧洲、非洲等地也有分布,是一种世界性珍稀食用菌。黑牛肝菌子实体营养价值较高,含有丰富的矿质元素、维生素、活性多糖、多种人体必需氨基酸。研究表明,该菌提取物具有抗病毒、抗癌及增强人体免疫力的功效,可改善高血压高血脂高血糖症状。黑牛肝菌在医药和食品保健领域表现出极大的开发潜力。本试验拟从如下三个方面探讨黑牛肝菌对酒精诱导的急性肝损伤的保护作用。1、黑牛肝菌体外清除自由基作用。本试验采用水提醇沉法从黑牛肝菌子实体中提取出黑牛肝菌粗多糖,经Sevag法除蛋白后得到黑牛肝菌精多糖。然后分别测定了粗多糖和精多糖的生物活性物质组成及对·OH、O2-·清除作用和还原力分析。结果表明粗多糖中含有多糖、蛋白质、还原糖、总酚和黄酮,多糖含量为(622.50±1.87)mg/g,蛋白含量为(117.02±0.003)mg/g。精多糖不含黄酮和总酚,多糖含量达到(750.23±0.48)mg/g,蛋白含量只有(21.1±0.005)mg/g。黑牛肝菌精多糖经DEAE-Cellulose52离子交换柱分离纯化后,得到两种组分BAP Ⅰ和BAP Ⅱ对其中含量较多的成分BAP Ⅰ进行紫外扫描,图谱显示其不含核酸和蛋白质。粗多糖和精多糖都有一定的清除自由基的抗氧化作用,精多糖优于粗多糖。2、以黑牛肝菌精多糖(BAP)为试验材料,建立小鼠急性酒精肝损伤模型,进行功能性试验研究及病理切片观察。小鼠被随机分为空白对照组、模型组、阳性对照组(150mg/kg.bw).多糖各剂量组(100.200、400mg/kg.bw)。连续灌胃30d后,给予乙醇溶液建立动物急性肝损伤模型。结果表明,小鼠酒精灌胃后,模型组ALT、AST、 TG、 MDA水平与空白对照组相比显著升高,SOD、CAT、 GSH-Px、GSH水平显著低于空白对照组。说明酒精可造成抗氧化酶活力降低,损伤抗氧化非酶体系,导致膜脂质过氧化物升高。而BAP各剂量组可不同程度改善酒精代谢造成的损伤,降低AST、ALT. MDA水平,不同程度提高SOD、 CAT、GSH-Px活力和GSH含量。病理切片显示,模型组肝小叶中央静脉扩大,肝索排列紊乱,肝细胞明显肿胀,甚至出现肝细胞成片坏死。多糖低剂量组对改善肝细胞病理变化不明显,而中、高剂量组病理症状有较大程度改变。以上结果提示BAP可提高机体抗氧化能力,并能有效降低肝组织的损伤程度,对酒精所致急性肝损伤小鼠有明显的保护作用。3、急性酒精肝损伤小鼠肝组织超微结构的观察和相关凋亡基因Bcl-2、Bax和Caspase-3 mRNA表达。为进一步研究黑牛肝菌多糖(BAP)对酒精所致急性损伤小鼠的保护作用机理,本试验观察了小鼠急性酒精肝损伤肝组织超微结构的变化及采用荧光实时定量RT-PCR法检测了凋亡基因Bcl-2、Bax和Caspase-3 mRNA表达。超微结构表明,模型组视野内见大量脂滴,糖原增多,细胞核变形,核仁固缩,染色质分布异常,线粒体双侧膜破损,内质网核糖体脱落等现象。而在多糖组中,随着多糖剂量的增大,肝细胞内上述病变逐渐改善。模型组Bcl-2基因表达量与其他组对比显著降低,Bax和Caspase-3基因表达量显著升高。而多糖组可不同程度的使Bc1-2、Bax和Caspase-3基因表达恢复至空白对照组水平。急性酒精性肝损伤可造成小鼠肝细胞超微结构的病变,导致Bcl-2基因表达下调,Bax、Caspase-3基因表达上调,促进肝细胞的凋亡,引起肝损伤。黑牛肝菌多糖可以通过调节Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA的表达,对小鼠急性肝损伤起到保护作用。