苹果柱状树形Co基因鉴定及其分子标记的应用

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苹果(Malus × domestica Borkh)是我国主要的栽培树种之一,其面积和产量均居世界首位。大力发展苹果种植产业,对增加农民收入、调整农业产业结构具有非常重要的意义。但是在实际生产栽培中,果园郁闭、机械化程度低、人工成本的增加等现象已成为目前苹果生产中亟待解决的问题,而矮化密植栽培方式可以有效的解决这些问题,这种方式便于集约化生产,且机械化程度高,非常符合苹果的现代化栽培模式。柱型苹果作为一种特殊的矮化突变类型,在自然状态下,主要表现为节间短,主枝和主干笔直,多短枝且无较大侧枝,树冠小,结构紧凑,非常适合高度密植栽培,被认为是苹果高密度栽培以及集约化与机械化生产的理想株型。前人已筛选出与Co基因连锁的若干分子标记,但仍未能从分子水平上阐明柱型苹果独特的生长特性。因此,有必要对苹果的柱型性状形成的分子机制进行深入系统的研究。本研究以柱型苹果品种‘润太一号’,‘舞佳’和普通型苹果‘富士’,‘福布拉斯’,‘华硕’等以及柱型与普通型苹果的杂交后代为试验材料,采用实时荧光定量PCR对候选基因进行鉴定与分析,并对内源激素的含量进行了比较分析,主要结果如下:(1)柱型苹果Co基因的筛选与表达分析。以柱型苹果‘润太一号’,‘舞佳’和普通型苹果‘福布拉斯’,‘华硕’四个苹果品种为试验材料,分别采集顶芽、侧芽、茎尖、侧芽茎尖、花、果实、叶片、根等样品,根据最新发表的苹果基因组和定位区间,选择相关基因,分别使用柱型苹果与普通型苹果的茎尖和侧芽茎尖部位进行PCR扩增,并用实时荧光定量PCR进行基因表达分析,结果表明,基因MD10G1184100,MD10G1185400,MD10G1185600以及MD10G1190500在柱型与普通型苹果的茎尖以及侧芽茎尖部位存在显著差异,然后对这四个基因进行不同部位和不同时期的基因表达模式进行了分析,发现基因MD10G1184100在柱型苹果的根部表达显著高于其他部位,MD10G1185400和MD10G1185600基因都是在柱型的侧芽茎尖中显著表达,而基因MD10G1190500则是在柱型苹果的顶芽中显著表达;而在不同时期中,基因MD10G11185600在柱型苹果茎尖生长期的表达量最高,其余的均是在柱型苹果的萌芽期表达量最高。(2)选择与柱型性状相连锁的标记,对柱型苹果、普通型苹果以及柱型与普通型苹果的杂交后代进行柱型性状的筛选与鉴定。研究表明,29f1-JWI1r标记以及Normal上游与Columnar下游这一柱状特异性引物在进行PCR扩增后,仅在具有柱型性状的植株中出现特异的目的片段,其结果简单直观,且可以快速有效的鉴定出其是否为柱型性状。此研究结果可以利用相关分子标记辅助选择柱型苹果。(3)以柱型苹果‘润太一号’与普通型苹果‘富士’为试材,对其冠径、茎粗、枝组数以及节间长度进行测量分析。结果表明,柱型苹果的冠径、茎粗、节间长度与普通型苹果之间存在显著差异,普通型苹果的冠径显著高于柱型苹果的冠径,约是其1.99倍;而柱型苹果的茎粗则显著高于普通型,约是普通型苹果的1.18倍,且普通型苹果的节间长度约是柱型苹果的1.27倍;同时在对枝组数进行调查统计时发现,柱型苹果的短枝率达78.8%,而普通型苹果的只有64.7%,是普通型苹果的1.21倍;而普通型苹果中的长枝、中长枝及超长枝的比例均高于柱型苹果,其分别是柱型苹果中除短枝外其他枝条类型的1.37、1.65和1.80 倍;(4)以柱型苹果与普通型苹果的不同发育时期的叶片为试材,对内源激素含量进行了比较分析。结果表明,ZR、ABA、GA3在普通型苹果中的含量均高于柱型苹果中的含量,并且随着叶片的生长而不断变化;而GA3与ZR在生长初期时,在柱型与普通型苹果中存在显著差异。ABA则是在生长初期、生长中期以及生长期时均有显著差异;而IAA在柱型与普通型中的含量随叶片的生长发育变化波动较大,并且两者之间呈现相互错落的趋势,且在生长初期与生长中期时有显著差异。
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