酿酒酵母3-磷酸甘油脱氢酶基因和3-磷酸甘油酯酶基因在大肠杆菌中的共表达

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作为改造代谢途径获得直接转化葡萄糖生产1,3-丙二醇的基因工程菌的第一步,本论文对产甘油基因工程菌的构建做了以下研究。 首先,从酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae中克隆3-磷酸甘油脱氢酶(GPD1)和3-磷酸甘油酯酶(HOR2)基因,分别构建重组质粒pSE-gpd1和pSE-hor2,然后进行两种重组基因的表达试验,一种是双表达盒法,另一种是多顺反子法。 在第一种表达法中含双表达盒的重组E.coli JM109菌株在含1%葡萄糖的摇瓶发酵培养基中于37℃培养24小时,有甘油产生,产甘油率为1.18g/L。 在第二种表达方法中以JM109为宿主的含多顺反子的重组菌株在含1%葡萄糖的摇瓶发酵培养基中于37℃培养24小时,有甘油产生,产甘油率为3.79g/L。而以BL21作为宿主时,重组菌株发酵罐发酵28小时,产甘油率为22.64g/L,葡萄糖的转化率为45.3% 研究结果表明:将gpd1和hor2基因引入大肠杆菌,在大肠杆菌中构建了一条可将葡萄糖直接转化成甘油的新的代谢途径是可行的。同类研究在国内尚无报道。
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