第一部分：不同神经示踪剂组合对大鼠脊髓运动神经元的逆行标记效率比较摘要目的探讨神经示踪剂Fluoro-Gold(FG)、True Blue(TB)和Fluoro-Ruby(FR)两两组合以不同方式给药(神经内注射/胫神经切断浸泡)对脊髓运动神经元的标记效率差异,为采用二次神经逆行示踪术研究再生神经重支配准确性奠定基础。方法健康成年雌性SD大鼠18只,随机分为6组,每组3只。采用大鼠胫神经示踪模型,采取神经内注射与神经切断后近侧断端浸泡(20min)两种方式,分别对FG.TB和FR的两两组合进行示踪试验,组别如下：FG联合FR注射组/断端浸泡组、FG联合TB注射组/断端浸泡组、FR联合TB注射组/断端浸泡组。示踪术后5天,取脊髓腰3到腰6节段冷冻纵切,激光共聚焦显微镜进行显微成像和计数。结果FG联合TB示踪标记的运动神经元数量最多,平均标记数在3200左右,且双标比例较高(80%～85%)；FG联合FR示踪后平均标记运动神经元数也超过3000,但低于FG联合TB；FR联合TB示踪时运动神经元标记数最少,仅有含FG者的2/3左右,双标比例也最小。神经断端浸泡(20min)的方式给予示踪剂时标记数量仅为神经内注射的2/3左右。结论FG联合TB以及FG联合FR示踪对脊髓运动神经元的标记效率较高,且神经内注射示踪剂效果优于持续20分钟的神经断端浸泡。综合考虑示踪剂摄取效率、色彩辨识度等因素,FG联合TB是较好的神经逆行示踪剂组合。第二部分：神经内注射荧光示踪剂对大鼠神经功能的影响摘要目的考察荧光神经示踪剂荧光金(Fluoro-Gold,FG).真蓝(True Blue,TB)和荧光红(Fluoro-Ruby,FR)对正常神经功能的影响,为采用二次神经逆行示踪术研究神经重支配准确性的示踪剂选择提供参考依据。方法在大鼠胫神经内注射5%FG、4%TB或10%FR(剂量均为5μ1),以等体积生理盐水注射、胫神经切断和假手术组为对照,采用激光多普勒血流灌注成像、足迹试验、红外热疼觉痛测定等方法评价上述荧光示踪剂对大鼠运动、感觉和植物神经的功能影响。采用组织形态学方法观察注射点远侧神经组织的病理学变化和示踪剂对运动神经元的标记效率。结果FG组大鼠注射示踪剂后立即出现足底血管显著扩张；术后3、14天,胫神经运动功能几乎完全丧失,胫神经功能指数(TFI)降到-100左右；足底热痛觉反应潜伏期明显延长；注射点远侧出现严重的神经组织变性,但FG逆行示踪对运动标记效率最高。TB组亦能观察到显著的神经性血管舒张,但对运动神经功能的影响和神经组织变性严重程度较FG组轻,其运动神经元标记效率低于FG组。FR对神经功能几乎没有影响,但对运动神经元标记效率最低。结论FG作为神经示踪剂可能导致严重的运动、感觉和植物神经功能障碍,TB组对神经功能影响较轻,而FR注射几乎不影响神经功能。第三部分：人工神经移植物修复大鼠坐骨神经损伤后运动神经重支配准确性初步研究摘要目的了解壳聚糖/PLGA人工神经移植物修复大鼠坐骨神经缺损后再生运功神经纤维长入远侧胫神经的准确性,为探讨人工神经移植物修复周围神经缺损的机理提供依据。方法健康成年雌性SD大鼠24只,随机分为4组(每组6只)：壳聚糖/PLGA人工神经移植物修复坐骨神经3mm缺损组(C/P-3mm组)、壳聚糖/PLGA人工神经移植物修复坐骨神经6mm缺损组(C/P-6mm组)、自体神经修复坐骨神经6mm缺损组(自体神经组)、坐骨神经钳夹伤组(钳夹伤组)。制备神经损伤修复模型前在近胭窝处行左胫神经切断予4%True Blue (TB)浸泡示踪术,14天后如前述进行坐骨神经损伤修复术。修复术后3个月在桥接段远侧、原示踪处以近再次切断胫神经予以5%Fluoro-Gold (FG)浸泡示踪,5天后动物常规灌注固定,取脊髓腰3到腰6节段,恒冷冻纵切,激光共聚焦显微镜扫描、计数并分析脊髓运动神经元被不同示踪剂标记情况,计算重支配准确率(双标数/TB标记总数)和错配率(FG单标数/FG标记总数)。结果C/P-6mm修复组被标记神经元总数较钳夹伤组、自体神经组和C/P-3mm修复组低。自体神经组、C/P-3mm和C/P-6mm修复组被TB标记的运动神经元总数相当,但均明显少于钳夹伤组。钳夹伤组胫神经运动纤维重支配准确率在95%左右,其余3组在84%左右。自体神经组错生入胫神经的运动神经元数量明显多于其余各组,而C/P-6mm修复组胫神经内再生运动神经纤维数量明显少于其余各组。自体神经组错配率达30%左右,明显高于其余各组(15%～20%)。结论与自体神经修复相比,壳聚糖/PLGA人工神经移植物桥接修复大鼠坐骨神经3mm/6mm缺损可明显降低再生运动纤维进入胫神经的错配率。