【摘 要】
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目的:探讨IL-17A是否通过调控大鼠支气管成纤维细胞自噬对炎性细胞因子的表达产生影响。方法:1.酶联合消化法+组织块贴壁法培养RBFs,镜下观察第34代形态,免疫荧光法鉴定RBFs标志蛋白波形蛋白。2.本课题组前期实验人员用雷帕霉素诱导RBFs自噬的模型,并用CCK8法检测IL-17A、雷帕霉素最适的作用浓度和时间。IL-17A以20ng/m L 24h为最佳干预浓度及干预时间。雷帕霉素以2nm
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目（82060005）IL-17A通过PI3K/AKT/mTOR途径调节支气管成纤维细胞自噬在COPD气道炎症及气道重塑过程中的作用； 贵州省科技计划项目（黔科合支撑S[2020]2378号）；
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目的:探讨IL-17A是否通过调控大鼠支气管成纤维细胞自噬对炎性细胞因子的表达产生影响。方法:1.酶联合消化法+组织块贴壁法培养RBFs,镜下观察第34代形态,免疫荧光法鉴定RBFs标志蛋白波形蛋白。2.本课题组前期实验人员用雷帕霉素诱导RBFs自噬的模型,并用CCK8法检测IL-17A、雷帕霉素最适的作用浓度和时间。IL-17A以20ng/m L 24h为最佳干预浓度及干预时间。雷帕霉素以2nmol/m L 24h为最佳干预浓度及干预时间。3.分组:对照组;IL-17A组;雷帕霉素组;雷帕霉素+IL-17A组。4.Western Blot检测RBFs自噬后LC3Ⅱ/I蛋白的表达。5.ELISA法检测RBFs自噬后上清液中IL-6、IL-8、CCL20的含量。结果:1.酶联合消化法+组织块贴壁法成功培养RBFs,免疫荧光化学法鉴定第三代RBFs,后于倒置荧光显微镜下拍照,波形蛋白（Vimentin）抗体为鉴定抗体。通过免疫荧光法成功鉴定RBFs,RBFs表达波形蛋白的胞浆被染成绿色,胞核被染成蓝色。证明本实验的研究对象是支气管成纤维细胞。2.WB结果:与对照组比较,IL-17A的干预下调了LC3Ⅱ/I蛋白的表达（P<0.05）;雷帕霉素预处理,加入IL-17A干预后LC3Ⅱ/I蛋白表达较雷帕霉素组降低（P<0.05）。3.ELISA结果:与对照组比较,IL-17A组、雷帕霉素组及雷帕霉素+IL-17A组IL-6、IL-8、CCL20水平升高（P<0.05）;与IL-17A组及雷帕霉素组比较,雷帕霉素+IL-17A组IL-6、IL-8、CCL20表达水平均下降（P<0.05）。结论:1.IL-17A能抑制RBFs的自噬活性。2.RBFs可产生IL-6、IL-8、CCL20,且IL-17A可通过抑制自噬影响其分泌。3.适度上调自噬可能有利于改善对IL-17A所致的RBFs炎性因子的失调。
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