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目的:
采用人工合成的视黄醇类结合蛋白(Interphotoreceptor Retinoid BindingProtein,IRBP)和百日咳杆菌的毒素(Purified Bordetella pertussis toxin,PTX),建立C57BL/6小鼠的自身免疫性葡萄膜炎模型(experimental autoimmuneuveoretinitis,EAU),为腺苷A2A基因敲除对小鼠自身免疫性葡萄炎影响研究建立模型。
方法
1.实验动物:选雌性C57BL/6小鼠43只,6-12周龄鼠(体重20-25g),分为5批次,每批均随机选用1~2只小鼠作为阴性对照组。
2.视黄醇类结合蛋白(Interphotoreceptor Retinoid Binding Protein,IRBP)序列GPTHLFQPSLVLDMAKVLLD,由人工合成。
3.建模操作:小鼠全麻后,研究组:取IRBP与完全弗氏佐剂(Freunds completeadjuvant,FCA)按1∶1体积混合得到混合液,分别在小鼠的颈部,尾根部,双胸侧部4个点,皮内注射300μg,然后腹腔注射不同剂量的纯化的百日咳杆菌的毒素(PTX)。阴性对照组小鼠,同样四个位点皮内,腹腔注射PBS。注射2周开始观察小鼠眼底、眼前节炎症反应并记录。注射第21天处死小鼠,取眼球。固定、石蜡包埋、视网膜组织切片、HE染色。
结果:
1.实验鼠34只。实验21天时仍然存活30只,眼球取样60只眼,阴性对照9只,死亡小鼠中,PTX500ng组小鼠死亡4只,PTX200ng组350ng组小鼠死亡0只。
2.HE上建模成功的特征:视网膜层次紊乱、增厚,视网膜外核层和或内核层皱褶,视网膜各层炎症细胞浸润。
3.确定EAU建模成功35个眼球,占比58.3%。其中轻度(0.5分)18只,中度(1-2分)13只,重度(3-4分)4只。 PTX500ng组18只眼,评分在0.5分或以上16只,成模率88.9%; PTX200ng组,成模率仅为33.3%。PT350ng组,成模率为83.3%
结论 IRBP联合PT350ng诱导C57BL/6小鼠建立自身免疫性葡萄膜炎的动物模型的成模率达到83%,可以作为进一步诱发自身免疫性EAU的实验的参考条件。