玉米Eer1基因的克隆与功能分析

来源 :安徽农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chengjun_80
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玉米籽粒主要由胚乳和胚组成,胚乳是蛋白质和淀粉的储存场所,籽粒和胚乳发育决定了玉米的品质和产量,也是近年来玉米生物学研究的热点之一。粉质胚乳突变体是一类重要的种质资源,通常伴随着籽粒发育和细胞分化的改变以及更高的必需氨基酸水平,因此研究粉质胚乳突变体对理解籽粒发育机制及营养品质改良具有重要的意义。在本研究中,我们通过EMS诱变的方法,获得了一个粉质胚乳突变体,将其命名为eer1-1(endosperm and embryo regulator 1)。我们针对该材料进行的具体研究工作如下:(1)对eer1-1突变体表型分析发现其胚乳呈现粉质,胚异常,籽粒大小正常但百粒重比野生型下降了20%。与野生型相比,授粉后20天(20 DAP)籽粒的醇溶蛋白含量都降低,成熟的籽粒27-k Dγ-zein(醇溶蛋白)含量增加,19-k Dα-zein水平降低,但非醇溶蛋白含量无明显变化。(2)16 DAP的组织学切片观察显示eer1-1的胚发育异常,胚乳的基底转运层(Basal endosperm transfer layer,BETL)、和糊粉层(Aleurone layer,AL)细胞形态紊乱。(3)我们用图位克隆的方法将目标基因定在2号染色体上物理距离为370 kb的区间。在这个区间内有10个候选基因,测序分析发现gene3中起始密码子ATG下游529 bp处发生了C到T的碱基突变,密码子从CAA变为UAA,导致翻译提前终止,将gene3命名为ZmEer1。(4)为了进一步验证ZmEer1基因,我们获得了B73背景下EMS诱变的杂合eer1-2突变体,等位测试结果显示,确认是ZmEer1基因突变造成的表型变化。(5)成熟的eer1-2突变体的醇溶蛋白含量下降,特别是19-k Dα-zein,非醇溶蛋白含量增加。与野生型比,eer1-1和eer1-2突变体的直链淀粉含量都减少;总淀粉含量都增加。(6)系统进化树分析,ZmEER1与AtRKD5在进化树的同一分支,表明其为RKD型RWP-RK家族蛋白。(7)为了确定ZmEER1的定位位置,通过与GFP空载体对照,并使用DAPI染色,证明ZmEER1定位在细胞核,而酵母转录活性实验证明ZmEER1蛋白没有自激活活性。(8)RNA-seq数据表明ZmEer1通过影响蛋白、淀粉的生物合成等过程,造成籽粒的表型为粉质。
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