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研究背景与目的研究表明生物代谢基因是一类重要的影响肿瘤发病的易感基因,细胞色素P450酶(CYP450)多基因家族是一类重要的代谢酶基因,其中有30多个家族成员(同工酶)存在于人体内,但是目前鼻咽癌易感基因研究只涉及其中的两个成员CYP2E1、CYP1A1.为了寻找更多与广东地区鼻咽癌易感有关的CYP450基因多态,我们分析了CYP450基因在鼻咽组织中的表达状况,并对鼻咽组织表达阳性的3个CYP450基因进行PCR-测序,筛查散发鼻咽癌患者的CYP450基因的序列变异,然后选择一些位点进行病例一对照分析,检测其与鼻咽癌易感的关联,以期为鼻咽癌的人群筛查、诊断、预防提供有意义的分子标记物.研究方法与结果细胞色素P450酶系在鼻咽癌及非癌组织的表达目的:了解鼻咽部组织CYP450基因的转录表达状况.方法:从鼻咽癌及鼻咽炎的非癌组织提取RNA,以两种方法检测CYP450基因的表达.(1)混合7例鼻咽非癌组织的RNA构建cDNA文库,进行克隆测序及生物信息学分析,检测CYP450基因的表达;(2)逆转录14例鼻咽癌组织及8例非癌组织的RNA为cDNA,以PCR扩增检测CYP450基因的表达.CYP2F1、CYP2A13和CYP4B1基因序列分析目的:分析鼻咽癌病人的CYP2A13、CYP2F1、和CYP4B1三个基因的多态性,寻找与鼻咽癌易感有关的CYP450基因多态.选择CYP2A13是因为最新研究表明该基因主要在呼吸道高表达,并且代谢烟草中的致癌物4-甲基亚硝胺-1-(3-吡啶)-1-丁酮(NNK)的活性非常高;选择CYP4B1、CYP2F1是因为这2个基因在鼻咽cDNA文库和RT-PCR都检测有表达.方法:收集472例散发性鼻咽癌病人和709例正常对照的全血标本,采用德国Qiagen公司的QIAamp DNA B1ood Midi kit试剂盒提取全血DNA.先采用PCR直接测序法在40-45例鼻咽癌病人全血DNA中对CYP2A13、CYP2F1和CYP4B1三个基因进行了突变检测.再用PCR-RFLP和PCR-直接测序法检测CYP2A13基因的4多态位点在大样本的鼻咽癌病人和正常人中的频率.统计学分析采用x<2>检验.结论 该研究首次检测了鼻咽癌及非癌组织CYP450基因的表达,结果表明鼻咽部CYP450基因表达种类较多,其中部分基因的功能与致癌物的活化有关,这些基因是否与鼻咽癌易感有关值得进一步研究.CYP2A13基因在鼻咽癌病人中存在序列变异,通过大样本分析其中4个高频或引起氨基酸改变的多态,结果表明这些多态的频率在鼻咽癌和正常人之间的差异没有显著意义.该研究首次检测了CYP2F1、CYP4B1基因在鼻咽癌病人中的序列变异,发现了这两个基因的大量多态性,其中一些对蛋白质的编码序列影响非常大.我们正在对这些多态与鼻咽癌易感性的关系作进一步研究.