【摘 要】
：
为了研究高效广谱鸡基因工程重组复合抗病毒制剂,本研究采用SOE-PCR构建鸡ChIFN-α-linker-ChIL-2嵌合基因并进行原核表达.通过自行创新的蛋白纯化方法对表达的重组融合蛋白(rChIFN-α-linker-ChIL-2)进行纯化。分别检测rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在细胞上抗病毒活性、促鸡T淋巴细胞增殖活性以检测其在细胞上活性；检测与抗ChIL-2单抗发生特异性
【机 构】
：
河南省动物疫病预防控制中心,河南郑州,450008 河南省动物疫病预防控制中心,河南郑州,5000
【出 处】
：
中国畜牧兽医学会2008年学术年会暨第六届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会
论文部分内容阅读
为了研究高效广谱鸡基因工程重组复合抗病毒制剂,本研究采用SOE-PCR构建鸡ChIFN-α-linker-ChIL-2嵌合基因并进行原核表达.通过自行创新的蛋白纯化方法对表达的重组融合蛋白(rChIFN-α-linker-ChIL-2)进行纯化。分别检测rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在细胞上抗病毒活性、促鸡T淋巴细胞增殖活性以检测其在细胞上活性；检测与抗ChIL-2单抗发生特异性免疫反应的活性以检测其免疫学活性；测定rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在SPF鸡胚内抗不同病毒活性；测定rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在鸡体内的抗病毒活性和免疫增强活性.结果表明:成功构建并克隆了ChIFN-α-linker-ChIL-2嵌合基因.表达的rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白分子量大小约35.9 kDa,纯化后融合蛋白纯度在96％以上.rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在CEF细胞上具有明显抗病毒活性,其抗VSV和IBDV活性明显高于单-rChIFN-α的抗病毒活性；最低剂量为250pg的rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白可对鸡T淋巴细胞具有明显的增殖活性,增殖活性随剂量的增加逐渐增强.rChIFN-α-linker-ChIl-2蛋白在体外可和抗ChIL-2单抗发生特异性免疫反应.干扰素活性单位为100 IU的rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在SPF鸡胚内可明显减轻NDV和AIV H9N2毒株所引起的胚体出血程度,并能显著延长鸡胚存活时间.rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白对NDV灭活疫苗具有显著的免疫增强作用,但对NDV活疫苗具有免疫抑制作用.本研究表明rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在鸡体内外均具有ChIFN-α和ChIL-2蛋白的双重生物学活性,这为进一步研究以rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白为主要成分的基因工程抗病毒制剂在鸡体内抗病毒应用研究奠定了基础.
其他文献
针对CSFV的保守区设计并筛选出一套RT-LAMP引物,以石门株为标准毒株,采用梯度稀释法对各反应要素进行优化。最终确定CSFV RT-LAMP的反应体系为:4mM镁离子浓度,0.8 M甜菜碱,1.4 mM dNTP mix,8 U Bst DNA大片段聚合酶,2 U AMV反转录酶,5 pM F3,5 pM B3,50 pM FIP,50pM BIP,25 pM LF,25 pM LB,1×Th
为考察日粮添加GABA对热应激哺乳母猪生产性能及血液指标的影响,选取选择胎次、预产期和体重近似,品种一致的经产大约克母猪14头,随机等分到GABA组与对照组中,每个处理7个重复,每个重复1头母猪,做21d饲养试验。结果表明,GABA在减轻母猪哺乳期体重损失、减少体脂动员、促进采食及仔猪生长方面效果良好.GABA组母猪断奶重(P<0.1)、分娩后第1周背膘厚(P<0.01)、仔猪窝增重(P<0.05
为研究枸杞多糖(LBP)对己烯雌酚(DES)诱导的仓鼠睾丸氧化损伤的保护作用,成年雄性仓鼠随机分为4组,即正常对照组、DES组、DES+LBP组、DES+Vc+VE组.连续处理7d后统计睾丸重量和相对重量,观察睾丸组织结构的变化,检测睾丸组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总抗氧化能力(T-A0c)和丙二醛(MDA)的含量.结果LBP显著逆转了DES引起的生精损害,
目的:研究锌在肉仔鸡十二指肠、空肠和回肠中的吸收机理.方法:试验观测了不同水平锌在肉仔鸡小肠不同部位中的吸收速率,对数据进行非线性回归拟合以研究锌的吸收动力学特点,并采用Real-time PER检测肉仔鸡小肠中MT、znT1和ZnT5 mRNA的相对表达量.结果:吸收动力学研究表明,十二指肠、空肠的锌的最大吸收速度(Jmax)分别为5.32±1.46、2.57±0.39 nmol/min/cm,
本文研究了免疫抑制素以提高奶牛超数排卵的效率并增加胚胎产量.免疫组首次免疫重组抑制素α亚基融合蛋白1mg/头,首免后第28和第56天分别进行加强免疫,剂量为0.5mg/头.对照组同期注射矿物油与生理盐水混合佐剂.在第2次加强免疫后11d,采用FSH四日递减法进行超排处理,并根据发情人工输精,试验一使用常规精液输精,试验二采用性控精液输精,输精后第7天进行冲胚.结果显示:主动免疫抑制素能够有效提高血
鸡新城疫(Newcastle disease,ND)是由鸡新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)引起的一种主要侵害鸡，火鸡，野禽和观赏鸟，亦可感染人的高度接触性，急性，致死性传染病。本文介绍了利用血凝抑制(HI)试验检测杜仲叶对AA肉仔鸡新城疫H1抗体效价的影响，研究杜仲叶对鸡新城疫疫苗免疫的作用。
乳酸链球菌素(Nisin)是由乳酸链球菌产生的含有34个氨基酸的抗菌肽,对人体无害.本研究将患临床型乳房炎奶牛92头(107个乳区)和隐性型乳房炎奶牛90头(90个乳区)随机分成试验组和对照组.试验组的治疗方法是在患病乳区灌注Nisin；临床型乳房炎以庆大霉素乳房内灌注作对照,隐性型乳房炎的对照组不作任何处理.临床型乳房炎的Nisin治疗组细菌学治愈率和临床治愈率分别为60.8％和90.2％,而庆
为了既保护我国畜牧业的安全,又在检验检疫口岸实现马匹的快速通关,针对国内没有非洲马瘟病毒、西尼罗热病毒、马冠状病毒,而这几种病又是重要烈性传染病其病原不能引进这一难题.采用人工拼接的方式拼接了非洲马瘟病毒核酸序列、通过分子克隆技术获得西尼罗热、马冠状病毒等的特异基因片段,设计合成五种马病病毒高度保守的特异性核酸序列作为检测探针点制于芯片上,再用多重不对称PCR以拼接、克隆的核酸序列为模板扩增目的片
猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒引起的，以母猪发热、厌食和流产、死产、木乃伊胎、弱仔等繁殖障碍以及仔猪的呼吸道症状和高死亡率为特征。本文从病原学方面进行研究了某猪场感染发病的具体原因。
为了解新孢子虫病在奶牛流产中所起作用,了解流产胎儿体内新孢子虫的分布情况,对北京等地区奶牛的流产胎儿脏器进行巢式PCR检测.将流产胎牛的检测结果与对母牛的血清ELISA检测结果进行对比.结果:流产胎儿体内新孢子虫DNA检出率高达58％,脑组织的检出率最高,高达85.7％,其次是肾脏和肌肉.对流产母牛追踪调查的ELISA结果显示阳性率为36.8％,与PCR检测符合率仪70％.提示因新孢子虫感染引起的