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目的制备出一种新型的用于三维细胞培养的三维大孔微球,研究比较明胶和水作为致孔剂对微球孔径的影响。方法以壳聚糖,明胶作为主要材料,三聚磷酸钠(STPP)为主要交联剂,利用高压静电法结合三次冷冻冻干法和离子交联法制备具有多孔结构的壳聚糖多孔微球和壳聚糖;明胶多孔微球,光镜、扫描电镜、石蜡切片H&E染色后观察壳聚糖多孔微球和壳聚糖;明胶多孔微球的形态、表面及内部结构、孔径大小。结果高压静电法结合三次冷冻冻干法和离子交联法制备的壳聚糖多孔微球和壳聚糖;明胶多孔微球,球形良好,球体表面及内部均有较多微孔,表面与内部孔径相通。三次冻干后的壳聚糖多孔微球表面及内部孔径在10~30μm,孔较小,与细胞共培养后细胞不能进入微球内部生长;三次冻干后的壳聚糖;明胶多孔微球表面及内部孔径在50~200μm,孔壁薄,表面与内部相连通的大孔结构适合细胞迁徙进入微球内部生长。结论高压静电法结合三次冷冻冻干法和离子交联法可以制备得到三维大孔微球,明胶可作为致孔剂参与大孔的形成,大孔结构可利于细胞迁徙进入微球内部生长。