【摘 要】
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对送检的疑似坦布苏病毒感染的发病鸭进行了病原的分离和鉴定.参考Genbank中收录的TMUV全基因组序列,设计6对引物引物,结合5 race RT-PCR技术进行了两株TMUV分离株的全基因组序列测定和分析.结果成功分离到1株鸭源(ZC株)TMUV.动物回归试验显示两株分离株均可引起雏鸭典型的神经症状.全基因组核苷酸序列同源性分析表明,LQ株和ZC株与SX1株同源关系最近,分别为99.1％和99
【机 构】
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山东农业大学动物科技学院,山东泰安271018
【出 处】
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第五届全国禽病分子生物技术青年工作者会议
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对送检的疑似坦布苏病毒感染的发病鸭进行了病原的分离和鉴定.参考Genbank中收录的TMUV全基因组序列,设计6对引物引物,结合5 race RT-PCR技术进行了两株TMUV分离株的全基因组序列测定和分析.结果成功分离到1株鸭源(ZC株)TMUV.动物回归试验显示两株分离株均可引起雏鸭典型的神经症状.全基因组核苷酸序列同源性分析表明,LQ株和ZC株与SX1株同源关系最近,分别为99.1％和99％.E和NS1蛋白氨基酸同源性分析表明,两株分离株与其他TMUV分离株之间没有明显的遗传变异.亲缘关系最远的FJMH220株、AH2011株和GX2013G株三株TMUV均为番鸭源,TMUV毒株之间是否存在宿主差异性还有待进一步研究.根据TMUV全基因组测序结果结合Genbank中收录的TMUV全基因组序列以及酶切位点分析,设计了7对引物进行RT-PCR扩增.将各段依次克隆至pWSK29中,构建的感染性克隆质粒中(C10495G)位点突变作为分子标签,构建的感染性克隆质粒(命名为pWSK29-DTMUV).经Not Ⅰ酶切线性化后,通过T7体外转录为具有感染性的RNA,纯化后转染BHK21细胞,对收获的拯救毒株进行鉴定.以构建的ZC株感染性克隆质粒pWSK29-DTMUV为骨架,进行3端保守序列和次末端碱基的突变,并进行毒株的拯救和鉴定,进而分析3非编码区部分结构的生物学功能.结果显示,除CS1序列缺失毒株没有成功拯救外,其他毒株均成功拯救.在该位点突变毒株拯救过程中,C→G突变并未显著影响病毒的增殖,而缺失或突变为A、T碱基却使得病毒增殖缓慢.由于未对3次末端碱基突变株进行序列测定,因此,是否出现了回位突变导致毒株的增殖也有待进一步验证.而CS缺失突变株拯救拯救结果表明,CS1序列在病毒基因组复制过程中具有极为重要的作用,RCS2和RCS3序列的缺失对病毒复制增殖过程具有一定的抑制作用,而CS2和CS3的缺失并不影响病毒的复制增殖,但其缺失突变病毒的毒力是否发生变化也有待进一步研究.
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