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[目的]为了构建含有遗传标记的感染性克隆，进一步研究鸭圆环病毒的基因功能和致病机制.[方法]根据实验室分离鉴定的鸭圆环病毒GH01株基因组序列设计3对引物，将扩增全基因组顺式插入到pUC19载体中构建串连双拷贝重组质粒，并通过沉默突变获得含遗传标记的鸭圆环病毒感性克隆株；重组质粒经线性化后，与脂质体(100μg∶200μl)混合静脉、肌肉注射10日龄DuCV阴性雏鸭，于转染后第3、5、7、10、15、21d分别采集雏鸭外周血检测DuCV.[结果]扩增产物测序结果表明：能正确扩增出含有酶切位点和XhoⅠ遗传标记的2组DuCV全基因组(命名为IC-1、IC-2)，并将其头尾串联顺次克隆到pUC19载体中，获得了含有XhoⅠ遗传标记、双拷贝重组质粒(pIC-2DuCV)；血清样本检测显示，在转染第3、5、7d各组血清样本DuCV检测均为阴性，但在第10、15、21d 静脉、肌注组各样本均检出含有遗传标记的DuCV.[结论]本试验构建的DuCV全长基因组头尾串联二聚体感染性克隆DNA可以转染雏鸭并增殖出带标记的DuCV病毒粒子，为进一步研究DuCV分子特性和致病性机制奠定了物质基础.