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引言鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)感染引起的禽慢性呼吸道病(Chronic Respiratory Disease,CRD),广泛分布世界所有养禽国家,在我国部分地区感染率高达75%以上,严重阻碍养禽业的健康发展。控制MG感染的最根本有效方法就是对感染鸡群进行净化,从根本上切断MG的传播和流行。但由于经济原因,大多数鸡场仍采用疫苗防控。因此建立一种敏感性高、特异性强、快速有效的检测方法对鸡群的早期诊断和净化,以及对疫苗质量的监控和分子流行病学调查具有重要意义。材料与方法通过比对GenBank中的鸡毒支原体16S rDNA基因序列,在保守区域设计了1对引物,扩增186 bp目的片段,然后将扩增产物与pMD-18T载体连接,构建重组阳性质粒,以此为模板建立检测鸡毒支原体的SYBRG Gree n I real-time PCR方法,并进行灵敏性、特异性、重复性及临床样品和疫苗检测试验。结果与讨论结果显示,该方法在1.96×10s copies/μL~1.96×10~2 copies/μL范围内线性关系良好,相关系数0.999;最低检测限为1.96×10~1copies/μL;与禽类其它呼吸道病原无交叉反应;批内及批间变异系数均低于2%。结果表明,该方法敏感性高、特异性强、重复性好。用该方法抽检30份疑似病例的肺脏组织,结果检出12份阳性,同时用普通PCR和血清平板凝集试验对这些病料进行检测,结果分别检出10份和7份阳性。检测结果说明该方法敏感性明显高于普通PCR和血清平板凝集试验方法。采用建立的SYBR GreenⅠreal-time PCR方法对两种弱毒疫苗的病毒含量进行了测定,结果测得MG的含量为1.6×10~5copies/μL、1.0×10~5copies/μL,为弱毒疫苗的质量监控提供了一种新的快速检测方法。结论本研究建立的SYBR GreenⅠreal-time PCR方法特异性强、重复性好,定量限为1.96×10~2copies/μL,检测限为1.96×10~1copies/μL,灵敏度比RT-PCR高100倍,还可避免常规PCR电泳检测所带来的高污染率,并且可精确定量,可应用于MG感染引起的慢性呼吸道病的早期检测及疫苗监测等方面的定量研究。