【摘 要】
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为了构建隐孢子虫鼠基因型CP15基因重组真核表达质粒，检测其重组质粒在Hela细胞中的表达。采用PCR法，从pMD18-T-CP15菌液中扩增了CP15及含寡聚脱氧核苷酸（CpG-ODN）的CP15基因，酶切测序鉴定；将该基因亚克隆至pVAX-1载体中，用脂质体介导的方法转染Hela细胞，RT-PCR法、间接免疫荧光法和Western blot法检测表达蛋白的生物学活性。结果显示，扩增了约360
【机 构】
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宁夏大学农学院,银川750021 中国农业科学院上海兽医研究所 农业部动物寄生虫学重点开放实验室 中国农业科学院动物源性食品安全研究中心,上海 200241
【出 处】
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上海市畜牧兽医学会2011年学术年会
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为了构建隐孢子虫鼠基因型CP15基因重组真核表达质粒，检测其重组质粒在Hela细胞中的表达。采用PCR法，从pMD18-T-CP15菌液中扩增了CP15及含寡聚脱氧核苷酸（CpG-ODN）的CP15基因，酶切测序鉴定；将该基因亚克隆至pVAX-1载体中，用脂质体介导的方法转染Hela细胞，RT-PCR法、间接免疫荧光法和Western blot法检测表达蛋白的生物学活性。结果显示，扩增了约360 bp和380 bp的隐孢子虫鼠基因型CP15和含CpG-ODN的CP15基因，酶切测序鉴定成功构建了pVAX1-CP15和含有CpG-ODN的重组真核表达质粒pVAX1-C-CP15。转染Hela细胞后，用RT-PCR法检测到外源基因有效的转录，用间接免疫荧光、SDS-PAGE和Western blot法检测到外源基因的有效表达。结果表明，构建的重组真核表达质粒能够在Hela细胞中成功转录和表达，并且表达产物具有良好的免疫活性。这为下一步深入研制具有高保护性的隐孢子虫核酸疫苗奠定了基础。
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