【摘 要】
：
在兔出血症病毒主要结构蛋白VP60的N端插入双串联OVA CD8+T细胞表位(ovalbumin,卵清蛋白第257-264位氨基酸),研究外源片段对VP60蛋白表达及病毒样颗粒(VLPs)装配的影响,分析VP60作为载体的可行性和对外源基因长度的耐受性.通过分子生物学方法将双串联OVA CD8+T细胞表位(257aa-264aa)插入至RHDV衣壳蛋白VP60基因序列的N端,得到重组VP60基因.
【机 构】
：
南京农业大学动物医学院,江苏南京210095;江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室 国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014
【出 处】
：
中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会
论文部分内容阅读
在兔出血症病毒主要结构蛋白VP60的N端插入双串联OVA CD8+T细胞表位(ovalbumin,卵清蛋白第257-264位氨基酸),研究外源片段对VP60蛋白表达及病毒样颗粒(VLPs)装配的影响,分析VP60作为载体的可行性和对外源基因长度的耐受性.通过分子生物学方法将双串联OVA CD8+T细胞表位(257aa-264aa)插入至RHDV衣壳蛋白VP60基因序列的N端,得到重组VP60基因.利用杆状病毒表达系统表达嵌合蛋白,并命名为DN.经RT-PCR、间接免疫荧光、SDS-PAGE、western blot方法鉴定嵌合蛋白DN的表达,利用电镜观察嵌合蛋白病毒样颗粒的形成.结果表明嵌合VP60蛋白在杆状病毒表达系统中得到高效表达,且可形成与RHDV VLPs类似的病毒样颗粒.本研究为VP60作为载体系统,有效提呈外源片段的研究提供了重要依据,同时也为VLPs疫苗的研制奠定了基础.
其他文献
为筛选具有临床诊断价值的副猪嗜血杆菌(H.parasuis)单克隆抗体(MAb),本研究采用H.parasuis5型强毒株(HPS-5)免疫BALB/c小鼠,利用常规细胞融合技术制备了1株稳定分泌MAb的杂交瘤细胞株.Western blot 结果表明该MAb能够特异性识别所有H.parasuis标准菌株;免疫沉淀技术与蛋白质谱分析显示该MAb所识别蛋白为ATP结合盒转运蛋白(ABCT)家族的寡肽
胸膜肺炎放线杆菌(APP)是引起猪传染性胸膜肺炎的一种重要病原菌.为进一步降低其毒力以制备基因缺失弱毒疫苗,本研究以本实验室构建的APP血清7型sg菌株基因缺失株S8△clpP为亲本株,通过同源重组和蔗糖负向筛选的方法,敲除了ApxⅡ溶血素激活基因apxⅡC,构建了无抗生素标记的双基因缺失突变株S8△clpP/△apxⅡC.生物学特性结果显示,双基因缺失株仔生长速率没有明显改变,但溶血活性完全消失
以小鼠为动物模型研究了重组减毒沙门氏菌疫苗SL7207(pVAXD-N-Sa)的口服免疫规律.将菌株SL7207(pVAXD-N-Sa)及对照组SL7207(pVAX-S)、SL7207(pVAX-N)、SL7207(pVAXD)以1×109 cfu/只灌胃免疫小鼠,测定免疫小鼠诱导的血清IgG及肠道粘膜IgA抗体动态水平,同时测定免疫小鼠的外周血及脾脏淋巴细胞增殖水平、干扰素(IFN-γ)和细胞
目前已有研究报道口蹄疫病毒(FMDV)的L蛋白和3C蛋白能够抑制Ⅰ型干扰素的产生.然而,FMDV是否有蛋自抑制Ⅰ型干扰素发挥效应的信号通路未见任何报道.本研究首次发现FMDV的3C蛋白能够抑制JAK-STAT信号通路.3C蛋白的表达能够降低ISGs的转录和ISRE启动子的活性.STAT1和STAT2的蛋白水平、磷酸化水平和异源二聚体的形成并没有发生改变.但是3C蛋白阻止了STAT 1/STAT2的
将2种Toll样受体激动剂PolyI:C和R848,与口蹄疫灭活抗原混合后,再与矿物油佐剂乳化,并免疫猪,经猪的口蹄疫免疫攻毒试验,PD50明显提高,说明这2种激动剂可增强口蹄疫疫苗的免疫效力.
口蹄疫是严重危害中国畜牧业发展的重大动物疫病,疫苗免疫和精准区分免疫和自然感染动物,筛查并淘汰染毒家畜,是预防和控制口蹄疫的关键措施,也是中国口蹄疫防控的主要策略.针对目前广泛使用的传统口蹄疫灭活疫苗,因纯化不完全,免疫后,以检测病毒非结构蛋白抗体为金标准的鉴别技术,难以精准区别免疫和感染动物,既使使用先进的纯化技术,也不能完全清除与灭活病毒大小相同的非结构蛋白复合物,多次免疫后,仍能检测到病毒非
边界病病毒(Border disease virus,BDV)与牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、猪瘟病毒(CSFV)同属黄病毒科、瘟病毒属成员,是危害养羊业发展的重要病原.瘟病毒属病毒在猪、牛、羊间存在跨界传播,国外已报道BDV可以感染猪,且在猪群中存在BDV自然感染情况.本实验室于2012年先后从国内羊群中分离到不同的BDV毒株,为了研究国内毒株对猪的感染性,将分离自持续性感染绵羊的一株BDV病毒
为获得具有生物活性的牛疱疹病毒1型(BHV-1)病毒囊膜糖蛋白gE,采用PCR方法从BHV-1感染的牛肾细胞全基因组中扩增出约1.5 kb的gE基因片段,再将gE基因克隆到新型杆状病毒载体pFastBac-L1C-Bse中,构建重组转移质粒pFB-gE.将pFB-gE转化到杆状病毒基因组的DH 10Bac感受态细胞中,制备重组杆粒rBacmid-gE.将该重组杆粒的DNAE转染昆虫细胞Sf9,获得
本研究利用表位预测软件筛选了针对小反刍兽疫病毒F和H基因的4条多肽表位,进行了化学合成,将合成多肽免疫小鼠,通过ELISA、MTT法、NK细胞杀伤活性测定及T淋巴细胞亚群检测等免疫试验分析了预测表位的抗原性.结果表明:在筛选的4条多肽中,H242-255、F528-541和H349-362具有较好的体液免疫功能;H242-255、H392-405具有较好的细胞免疫功能.H242-255多肽能够满足
Border disease virus (BDV) causes border disease (BD) affecting mainly sheep and goats.In this study, one case of BDV infection was detected positively by RT-PCR from one slow-grown sheep in a sheep f