一株新奇的抗副猪嗜血杆菌单克隆抗体识别B细胞表位的鉴定及应用

来源 :中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:pigyu
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
为筛选具有临床诊断价值的副猪嗜血杆菌(H.parasuis)单克隆抗体(MAb),本研究采用H.parasuis5型强毒株(HPS-5)免疫BALB/c小鼠,利用常规细胞融合技术制备了1株稳定分泌MAb的杂交瘤细胞株.Western blot 结果表明该MAb能够特异性识别所有H.parasuis标准菌株;免疫沉淀技术与蛋白质谱分析显示该MAb所识别蛋白为ATP结合盒转运蛋白(ABCT)家族的寡肽透过酶(OppA);利用MAb对噬茵体12肽库进行淘选,8个阳性噬菌体克隆展示有"KTPAE-R"保守序列,对应于H.parasuis SH29755株和SH0165株的469位~475位的氨基酸残基.对OppA氨基酸序列比对结果表明H.parasuis与其它10种猪常见细菌病病原序列一致性为9.1%~74.5%,本研究结果为进一步研究H.parasuis感染的病原学诊断建立了良好的基础.
其他文献
为建立猪流行性腹泻病毒N蛋白间接ELISA检测方法,本研究从新分离PEDV流行株(JS-2013)中扩增其N基因,并将N基因克隆至pColdⅠDNA原核表达载体中,构建pColdⅠDNA-N重组质粒,经过IPTG诱导表达可知该重组蛋白呈可溶性表达,重组蛋白大小约为52 ku.Western blot分析表明表达产物具有良好的抗原活性.将纯化的N蛋白作为包被抗原建立PEDV ELlSA检测方法,并且
为建立一种快速检测猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的SYBR Green实时荧光定量PCR方法,本试验首先进行了PEDV全序列多重比较,然后,基于保守区序列,设计了一对检测PEDV特异性引物,通过RT-PCR、克隆、提取、纯化、定量分析等步骤制备标准品.经优化反应条件建立标准曲线,用PCR和其它常规方法对其特异性、灵敏性、重复性进行比较评
本实验室2012年从江苏太仓某发病猪场,分离到了一株变异的伪狂犬病毒,命名为JS-2012.为了研究该病毒对仔猪的致病力,本研究设计了3组实验(15日龄的阴性仔猪12头),两组分别通过肌肉注射和滴鼻接种JS-2012毒各5头,第三组2头做空白对照.接种后24 h两攻毒组仔猪的体温都开始升高,4d后两攻毒组仔猪均开始死亡,且死亡率均为100%,但滴鼻组仔猪发病死亡明显快于肌肉注射组.死亡的猪进行剖解
A newly emerged porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) that has caused severe reproductive losses in sows appeared in some regions of China in 2013.To explore the biology of this
猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因组5非翻译区(UTR)对病毒复制转录等生物合成过程至关重要,但其发挥作用的机制尚不清楚.本实验室在北美型(pAPRRS)与欧洲型PRRSV(pSHE)感染性克隆骨架上,分别在各自的5 UTR与ORF1之间插入"at"形成NdeⅠ位点,由此产生的两个突变全长克隆pTLNd4和pSHEnde,经过转染和传代证明突变位点的引入不影响两者的感染性.在此基础上,将两型
根据猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV),JS-2013株,N基因设计引物,RT-PCR扩增出目的大小片段.构建pcold-TF-N重组质粒,并将其转化感受态细胞BL21(DE3),目的蛋白在上清液中高效表达.采用Ni-NTA柱对重组蛋白进行纯化,得到浓度为1.5 mg/mL的目的蛋白.将纯化的重组N蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫后小鼠脾细
In this study, serum samples from swine and from humans occupationally exposed to pigs were obtained from pig farms in Guangdong province, in subtropical southern China, in order to investigate the pr
Streptococcus equissp.zooepidemicus (S.zooepidemicus, SEZ) is one of the common pathogens that can cause septicemia,meningitis, and mammitis in domesticated species.Identify the virulence factors of t
以小鼠脑组织cDNA文库为模板用PCR扩增C1qA、C3a和C3b等补体组分的cDNA序列,克隆到细菌双杂交载体pBT中获得重组诱饵质粒pBT-C1qA、pBT-C3a和pBT-C3b,分别与本实验室已经构建的猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2,SS2)的全基因组细菌双杂交文库中的膜蛋白、分泌蛋白、蛋白酶和肽酶等pTRG重组质粒共转化大肠杆菌XL1-Blue
为弄清某规模化养猪场副猪嗜血杆菌感染和流行的血清型及耐药性,本试验自该猪场发生浆膜炎和关节炎的猪病料样品中分离到6株副猪嗜血杆菌,通过细菌培养特性、生化试验和PCR扩增细菌16S rRNA基因片段并测序对分离株进行了鉴定:进而对分离株的血清型和耐药性进行了鉴定和分析.结果显示,自病猪不同组织脏器中分离鉴定了6株副猪嗜血杆茵菌株,体外培养需添加NAD,并具有典型"卫星生长"现象;生化试验结果符合副猪