【摘 要】
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目的：以腺相关病毒(AAV)为载体，将双突变的二氢叶酸还原酶(mDHFR)和绿色荧光蛋白(GFP)融合基因导入外周血造血干细胞，达到保护机体造血功能的目的，同时建立一个简便、易行的检测目的基因的体系。方法：构建携带人mDHFR和GFP融合基因的重组腺相关病毒载体(rAAV／mDHFR-GFP)，包装成重组病毒；将重组病毒感染人外周血来源的CD34+细胞，PCR、RT-PCR检测转染细胞的基因转染情
【机 构】
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南方医科大学南方医院肿瘤中心，广州 510515 北京302医院基因治疗研究中心，北京 10001
【出 处】
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2007亚太国际肿瘤生物学和医学学术会议暨首届解放军总医院肿瘤综合防治高峰论坛及第二届中国中青年肿瘤专家论坛
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目的：以腺相关病毒(AAV)为载体，将双突变的二氢叶酸还原酶(mDHFR)和绿色荧光蛋白(GFP)融合基因导入外周血造血干细胞，达到保护机体造血功能的目的，同时建立一个简便、易行的检测目的基因的体系。
方法：构建携带人mDHFR和GFP融合基因的重组腺相关病毒载体(rAAV／mDHFR-GFP)，包装成重组病毒；将重组病毒感染人外周血来源的CD34+细胞，PCR、RT-PCR检测转染细胞的基因转染情况，MTT法检测转基因组与未转基因组耐药性差异，流式细胞仪和荧光显微镜观察基因转染率。
结果：成功构建了rAAV／mDHFR-GFP重组载体并表达。PCR证实腺相关病毒载体可将mDHFR-GFPcDNA导入外周血造血干祖细胞。RT-PCR证实病毒转染后的CD34+细胞中有mDHFR和GFPmRNA的存在，MTT法证实转基因细胞耐药性较未转基因细胞有一定提高。rAAV／mDHFR-GFP重组病毒感染外周血CD34+细胞，感染率可高达25％，外周血CD34+细胞中可见绿色荧光蛋白表达。
结论：腺相关病毒载体可将mDHFR-GFP融合基因成功导入外周血干祖细胞，转入的目的基因在靶细胞中可有效表达，产生相应有功能的物质(包括蛋白质)，使经转染的外周血干祖细胞对MTX的耐药性增强，今后仍需进一步改善AAV结构、包装系统和基因转染技术，以提高基因转导效率。
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