【摘 要】
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为开发绿色环保抗菌制剂,作为饲料添加剂应用于生产实践,本研究以猪源抗菌肽PR39和PF1为研究对象,利用益生菌干酪乳杆菌构建了组成型融合表达PF1-PR39的重组乳酸菌系统rLpPG612-PPH-PF1-PR39,经Western blot和间接免疫荧光法鉴定,重组抗菌肽获得正确表达.采用动态生长曲线法和琼脂扩散法检测了重组肽抗大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、巴氏杆菌、李斯特氏菌、鼠伤寒沙门氏菌和
【机 构】
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东北农业大学动物医学学院,黑龙江哈尔滨,150030
【出 处】
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2016第六届中国兽药大会(中国畜牧兽医学会动物药品学分会第五届全国会员代表大会暨2016学术年会、中国微生物学会兽医微
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为开发绿色环保抗菌制剂,作为饲料添加剂应用于生产实践,本研究以猪源抗菌肽PR39和PF1为研究对象,利用益生菌干酪乳杆菌构建了组成型融合表达PF1-PR39的重组乳酸菌系统rLpPG612-PPH-PF1-PR39,经Western blot和间接免疫荧光法鉴定,重组抗菌肽获得正确表达.采用动态生长曲线法和琼脂扩散法检测了重组肽抗大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、巴氏杆菌、李斯特氏菌、鼠伤寒沙门氏菌和铜绿假单胞杆菌的活性,结果表明重组猪源抗菌肽PF1-PR39对大肠埃希氏菌、巴氏杆菌、鼠伤寒沙门氏菌和铜绿假单胞菌具有抑菌活性,而抗李斯特氏菌和金黄色葡萄球菌的活性不明显.为检测重组干酪乳杆菌促进动物生长作用,以BALB/c小鼠为对象进行了系统研究：连续灌服重组干酪乳杆菌21天,统计平均日采食量(ADFI)、平均日增重(ADG)和料重比(F/G)；采集免疫BALB/c小鼠肠黏液和血清等样本,采用ELISA方法检测免疫小鼠血清样本中IgG、IgM抗体水平,肠黏液样本中的sIgA抗体水平,以及TGF-β、TNF-α、IFN-γ、 IL-4、IL-6等细胞因子水平；对免疫小鼠攻毒产肠毒素大肠埃希氏菌和鼠伤寒沙门氏菌,以评价重组干酪乳杆菌对小鼠的保护作用,并检测其排菌情况.结果表明：灌服重组菌rLpPG612-PPHPF1-PR39的小鼠平均日增重极显著提高(p＜0.01),料重比显著降低(p＜0.05)；灌服重组菌rLpPG612-PPH-PF 1-PR39组小鼠血液中白细胞、淋巴细胞数和淋巴细胞比率与对照组相比,虽有所增加,但差异不显著；灌服重组菌rLpPG612-PPH-PF 1-PR39小鼠血清中IgG、IgM抗体水平均高于对照组小鼠,其中IgM抗体水平差异显著(p＜0.05),肠黏液中sIgA抗体水平虽有升高,但变化不明显；灌服重组菌rLpPG612-PPH-PF 1-PR39小鼠细胞因子TGF-β、TNF-α水平明显提高,细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-6水平下降；重组菌rLpPG612-PPH-PF1-PR39对小鼠感染产肠毒素大肠埃希氏菌和沙门氏菌具有一定的保护效应,保护率分别达到83.3％和66.7％.综上,本研究构建的重组菌rLpPG612-PPH-PF1-PR39具有一定的抑菌活性,能有效促进小鼠的生长性能,并提高机体的非特异性免疫功能,对致病菌感染具有一定的保护作用,研究结果为重组乳酸菌微生态制剂的研发与应用提供了依据.
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由结核分枝杆菌引起的结核病是一种慢性传染性疾病，是单病原菌引起的世界上死亡人数最多、造成危害性最大的传染性疾病，研制和开发预防结核病的新型疫苗对于有效控制结核病具有重要的公共卫生意义.本研究通过同源重组技术，将结核分枝杆菌重要保护性原FbpB和ESAT-6定点整合到减毒李斯特菌菌株LM△actA/plcB的基因组中，获得分泌表达融合蛋白FbpB-ESAT-6的重组菌LM∷ fbpB-esat-6.
细菌生物被膜是病原微生物产生耐药性、免疫逃逸和造成持续感染的重要因素之一，为弄清楚抗菌肽HJH-1对猪胸膜肺炎放线杆菌生物被膜的影响，采用聚苯乙烯微量测定法结合扫描电子显微镜技术，评价HJH-1对APP生物被膜的作用，结果表明，抗菌肽HJH-1在100ug/mL时可以显著抑制APP的生长(p＜0.05)，并可以显著降低APP生物被膜的形成，且在48h内均可显著降低APP生物被膜的形成，扫描电子显微
猪传染性胸膜肺炎是由猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumonia,APP)引起的一种高度传染性、致死性呼吸道疾病,给世界养猪业造成了巨大的经济损失.由于该病原菌血清型众多,各血清型间交叉保护性不强,且常伴随其它病原菌混合感染,给该病的治疗带来了巨大挑战.近年来,针对预防该病的研究主要集中在亚单位疫苗上,主要体现在对该病原菌外毒素、外膜蛋白、脂多糖、菌毛等亚结构的
大肠杆菌的多重耐药性已经严重威胁到抗生素资源及公共卫生安全。噬菌体裂解酶制剂被普遍认为是解决细菌多重耐药性的有效制剂。已经有应用于革兰氏阳性菌引发疾病的裂解酶制剂,却没有针对革兰氏阴性菌的裂解酶制剂。这是因为革兰氏阴性菌的外膜阻碍裂解酶与周质空间的肽聚糖相互作用而不能发挥裂解酶的杀菌作用。本研究将ColicinA的转运片段和识别片段与大肠杆菌噬菌体裂解酶融合在一起构建了一个融合蛋白(Colicin
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大肠埃希氏菌(又名大肠杆菌)常见于自然环境中,也是动物消化道的常住菌,属革兰氏阴性中等大小的杆菌.有些血清型的大肠杆菌具有致病性,有些不具有致病性,已有研究资料表明,大肠杆菌iss基因(increased serum resistance gene)的存在与否是判定大肠杆菌致病性的重要依据之一.因此,深入研究大肠杆菌iss基因与其致病力的关系对科学防治本病具有重要的指导意义.本研究分别采用套式PC
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