【摘 要】
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为制备蛋鸡TRPV6蛋白多克隆抗体,根据基因序列,设计一对特异性引物,以卵巢组织中提取的总RNA为模板,扩增蛋鸡TRPV6基因1801至2176位置的375 bp序列,构建原核表达质粒pET-32a(+)-TRPV6；将重组质粒转化BL21 (DE3),经IPTG诱导表达TRPV6融合蛋白,通过镍离子螯合柱纯化后免疫新西兰大白兔,获得兔抗鸡TRPV6多克隆抗体,分别通过酶联免疫吸附试验(ELISA
【机 构】
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Department of Veterinary Medicine, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095
【出 处】
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中国畜牧兽医学会第三届中国兽医临床大会
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为制备蛋鸡TRPV6蛋白多克隆抗体,根据基因序列,设计一对特异性引物,以卵巢组织中提取的总RNA为模板,扩增蛋鸡TRPV6基因1801至2176位置的375 bp序列,构建原核表达质粒pET-32a(+)-TRPV6；将重组质粒转化BL21 (DE3),经IPTG诱导表达TRPV6融合蛋白,通过镍离子螯合柱纯化后免疫新西兰大白兔,获得兔抗鸡TRPV6多克隆抗体,分别通过酶联免疫吸附试验(ELISA)法和Western-blot检测抗体的效价和抗体特异性.结果表明,本试验成功地构建原核表达载体pET-32a(+)-TRPV6,SDS-PAGE蛋白电泳检测发现目的蛋白约35 kD； Western-blot分析显示,表达的TRPV6融合蛋白具有良好的免疫源性,其抗体可与大肠杆菌表达的产物特异性结合；ELISA显示其抗体效价达1∶100000.因此,获得纯化的融合蛋白和多克隆抗体对研究TRPV6钙离子通道在蛋鸡髓质骨形成的作用机理起到重要作用.
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