【摘 要】
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目的:通过脂质体转染化学合成siRNA的方法在人肺鳞癌细胞株NCI-H226中沉默UbcH 10基因,同时以紫杉醇处理细胞,观察基因沉默联合紫杉醇处理对NCI-H226细胞增殖活性及凋亡的影响.方法:化学合成针对UbcH10基因的siRNA-UbcH10序列,脂质体转染siRNA至NCI-H226细胞,转染后24小时,Real Time-PCR、Western-blot分别检测UbcH10 mRN
【机 构】
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第二军医大学长征医院呼吸内科,上海,200003 第二军医大学长征医院病理科,上海,200433
【出 处】
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中国药理学会药物临床试验专业委员会首届学术研讨会
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目的:通过脂质体转染化学合成siRNA的方法在人肺鳞癌细胞株NCI-H226中沉默UbcH 10基因,同时以紫杉醇处理细胞,观察基因沉默联合紫杉醇处理对NCI-H226细胞增殖活性及凋亡的影响.方法:化学合成针对UbcH10基因的siRNA-UbcH10序列,脂质体转染siRNA至NCI-H226细胞,转染后24小时,Real Time-PCR、Western-blot分别检测UbcH10 mRNA及蛋白表达水平.接种siRNA转染及未转染NCI-H226细胞,使用紫杉醇(1μM)处理细胞,24、48小时后MTT检测细胞活性.接种siRNA转染及未转染NCI-H226细胞,使用紫杉醇(1μM)处理细胞24小时,流式检测细胞凋亡.结果:脂质体转染siRNA,可在NCI-H226细胞中有效沉默UbcH 10基因,转染后24小时,NCI-H226细胞中UbcH10基因的mRNA及蛋白含量分别下降至41.1％和45.6％.基因沉默能抑制NCI-H226细胞增殖活性,与未转染siRNA组比较,差异显著(P＜0.05),且紫杉醇处理联合基因沉默组效果要明显好于基因沉默组,且差异显著(P＜0.05).基因沉默组及基因沉默联合紫杉醇处理,可明显引起NCI-H226细胞凋亡,与对照组比较有显著差异(P＜0.05),联合处理组效果显著好于基因沉默组(P＜0.05),药物处理组对NCI-H226细胞凋亡则无明显影响(P＞0.05).结论:UbcH 10基因沉默,可显著增强NCI-H226细胞对于化疗药物紫杉醇的敏感性.
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