【摘 要】
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本研究旨在对EgM家族重组蛋白(EgM9、EgM123)免疫犬,检测其免疫持续期达到27wks的血清抗体变化情况.利用粗提法获得EgM家族重组蛋白免疫犬,设为免疫组,PBS为对照组,定期采集实验犬血清.运用双酶切方法获得EgM123基因,构建pET28a-EgM123原核表达载体,IPTG诱导目的基因表达,制备重组表达蛋白作为ELISA检测用抗原.利用ELISA方法检测其免疫持续期内的抗体变化及血
【机 构】
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新疆农业大学动物医学学院,新疆乌鲁木齐830000;新疆维吾尔自治区畜牧科学院兽医研究所,新疆乌鲁木齐830000
【出 处】
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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会
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本研究旨在对EgM家族重组蛋白(EgM9、EgM123)免疫犬,检测其免疫持续期达到27wks的血清抗体变化情况.利用粗提法获得EgM家族重组蛋白免疫犬,设为免疫组,PBS为对照组,定期采集实验犬血清.运用双酶切方法获得EgM123基因,构建pET28a-EgM123原核表达载体,IPTG诱导目的基因表达,制备重组表达蛋白作为ELISA检测用抗原.利用ELISA方法检测其免疫持续期内的抗体变化及血清中淋巴细胞因子IFN-γ和IL10的变化情况.利用粗提法获得较纯的一条约52 kD的条带,与预计的pET41b-EgM9和pET41b-EgM123蛋白大小相符,为免疫用抗原.利用酶切法获得EgM 123基因片段为657 bp,构建原核表达载体pET28a-EgM 123,经酶切鉴定和序列测定,插入到原核表达载体的基因片段为EgM 123基因,研究表明,EgM家族重组蛋白免疫犬,对免疫持续期27 wks实验犬血清进行检测,免疫组与对照组之间血清抗体差异显著(P＜0.05),细胞因子仅在5 wks前存在显著性差异(P＜0.05),为研制包虫病疫苗及相关检测试剂盒奠定了基础.
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