【摘 要】
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根据真菌细胞壁降解酶的同源保守序列设计兼并引物,通过RT-PCR、RACE-PCR、TAIL-PCR的方法克隆了玉米纹枯病菌(Rhizoctonia solani AG1-IA)的3种内切纤维素酶基因eg45-1
【机 构】
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山东农业大学植物病理学系,泰安271018
【出 处】
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中国植物病理学会2010年学术年会
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根据真菌细胞壁降解酶的同源保守序列设计兼并引物,通过RT-PCR、RACE-PCR、TAIL-PCR的方法克隆了玉米纹枯病菌(Rhizoctonia solani AG1-IA)的3种内切纤维素酶基因eg45-1、eg45-2 (45家族)、eg12(12家族),3种内切多聚半乳糖醛酸酶基因endo-pg1、endo-pg2、endo-pg3,1种外切多聚半乳糖醛酸酶基因ex-pg、4种蛋白酶基因pr-1、pr-2、pr-3、pr-4以及2种木聚糖酶xyn-1和xyn-2.内切纤维素酶基因eg45-1和eg12、多聚半乳糖醛酸酶基因endo-p1基因实现了在毕赤酵母Pichia pastoris GS115中的高效和功能表达,表达产物经Ni柱亲和层析或DEAE阴离子交换层析纯化,SDS-PAGE知分子量分别为29kDa (eg45-1)、26.4kDa (eg12)及35.5kDa(endo-pg1).纯化酶接种4～6叶期玉米叶片,2～3d后引起细胞坏死, 其中endo-pg1产物能够诱导玉米防卫基因苯丙氨酸解氨酶PAL、过氧化物酶POD及病程相关蛋白PR-1的表达.
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