【摘 要】
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目的：观察大黄素对脂多糖(LPS)诱导损伤的人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)的干预作用,探讨其通过调控Rho/ROCK通路、AKT通路对内皮细胞细胞骨架及通透性的影响,为其对内皮细胞功能的保护作用提供实验支持及理论依据.方法：0.2μg/ml LPS作用于HUVECs24h,诱导建立血管内皮损伤模型.Y27632(ROCK特异性抑制剂)和缬沙坦(西药对照,AngⅡ受体1拮抗剂,Rho/ROCK
【机 构】
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山东中医药大学附属医院肾内科,山东济南,250011 山东中医药大学附属医院中心实验室,山东济南,
【出 处】
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2014中国传统医药国际健康服务高峰论坛
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目的：观察大黄素对脂多糖(LPS)诱导损伤的人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)的干预作用,探讨其通过调控Rho/ROCK通路、AKT通路对内皮细胞细胞骨架及通透性的影响,为其对内皮细胞功能的保护作用提供实验支持及理论依据.方法：0.2μg/ml LPS作用于HUVECs24h,诱导建立血管内皮损伤模型.Y27632(ROCK特异性抑制剂)和缬沙坦(西药对照,AngⅡ受体1拮抗剂,Rho/ROCK信号通路的间接抑制剂)作为阳性对照药物.首先,以内皮细胞生物学功能PCR基因芯片技术筛选可能的基因改变,发现细胞骨架重构相关基因,观察Rho/ROCK、AKT和FAK-PI3K信号通路相关基因在其中起重要作用,尤以Rho/ROCK通路为主.结合基因芯片结果和文献中各基因功能,拟定观察Rho/ROCK通路中的关键基因如纤连蛋白(FN),整合素A5(ITGA5),Ras同源基因家族成员(RhoA),肌球蛋白轻链磷酸酶(MLCP),磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸肌醇3-激酶(PI3K),黏着斑激酶(FAK),血管内皮生长因子(VEGF),血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)的mRNA表达水平,进行实时荧光定量PCR验证,同时以Western blotting对ITGA5,RhoA,4,5-二磷酸磷脂酰肌醇(PIP2)和磷酸化的肌球蛋白轻链(PhPMLC)进行蛋白水平的研究.结果：(1)LPS成功诱导构建了HUVECs内皮损伤模型.LPS激活Rho/ROCK信号通路,提高Rho/ROCK通路相关基因、蛋白的表达(FN,ITG A5,RhoA,MLCP, PI3K FAK,VEGF,VEGFR2).Y27632和缬沙坦特异性阻断了Rho/ROCK通路,显现出对细胞骨架损伤的较强的保护作用.(2)大黄素的内皮保护作用复杂,涉及多条信号通路,通过轻度抑制Rho/ROCK通路、调节AKT和/或FAK-PI3K信号通路发挥调节保护作用.结论：大黄素对内皮细胞的保护机制,以Rho/ROCK信号通路为最主要的调节通路,还涉及AKT和/或FAK-PI3K通路,及其彼此间的串话.大黄素的调节机制较为复杂,通过轻度抑制Rho/ROCK通路、调节AKT和/或FAK-PI3K信号通路发挥调节保护内皮细胞的作用.
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