【摘 要】
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目的 K-ras基因点突变发生于早期腺瘤向中期腺瘤的转变阶段,可能是大肠癌恶变的始动基因.微流控芯片技术是近年迅速发展起来的新的微型分析系统,具有微型化、自动化、集成化及便携化的特点.本研究以K-ras基因点突变作为检测对象,将限制性片段长度多态性(RFLP)与微流控芯片相结合,建立将样品进样、分离、检测和记录等步骤连续自动处理的基因突变检测平台.方法 PCR扩增含有K-ras基因第一外显子的第1
【机 构】
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中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室,医学细胞生物学教育部重点实验室,卫生部细胞生物学重点实验室,沈阳 110001
【出 处】
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中华医学会医学细胞生物学分会第三届全国学术会议
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目的 K-ras基因点突变发生于早期腺瘤向中期腺瘤的转变阶段,可能是大肠癌恶变的始动基因.微流控芯片技术是近年迅速发展起来的新的微型分析系统,具有微型化、自动化、集成化及便携化的特点.本研究以K-ras基因点突变作为检测对象,将限制性片段长度多态性(RFLP)与微流控芯片相结合,建立将样品进样、分离、检测和记录等步骤连续自动处理的基因突变检测平台.方法 PCR扩增含有K-ras基因第一外显子的第12位密码子的片段,并进行Mva Ⅰ酶切,酶切产物以微流控电泳系统进行检测.采用光刻及高温封接技术制作通道为十字交叉形的玻璃微流控芯片,结合激光诱导荧光检测系统,建立微流控毛细管电泳技术平台.采用该平台对6种已知突变类型的大肠癌细胞系及98例大肠癌石蜡包埋组织中的K-ras基因突变进行检测.同时将大肠癌K-ras基因野生型细胞株HT29和纯合突变细胞株SW480以不同比例混合,研究系统的检测灵敏度.结果 RFLP结合微流控芯片电泳平台可在5 min内实现对K-ras基因的高效检测,6种大肠癌细胞系中K-ras基因的纯合突变、杂合突变及野生型均被准确检出.对不同比例野生型/纯合突变型混合细胞的检测显示系统的检测灵敏度可达1/10 000.该系统对98例石蜡包埋组织标本中K-ras的突变检出率为28.6％(28/98),显著高于测序的检出率13.3％(13/98).结论 本研究建立的RFLP结合微流控芯片电泳平台能够对K-ras基因突变进行高效检测,具有灵敏度高、特异性强、快速和低成本等优势,为快速进行肿瘤基因突变筛查及早期诊断提供了新的技术平台.
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