【摘 要】
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目的 本研究进一步确定真核翻译起始因子4E-结合蛋白1(4E-BP1)磷酸化在电离辐射细胞中对蛋白质翻译的调节作用以及电离辐射细胞中G2/M检查点和纺锤体结构检查点的功能,研究磷酸化4EBP1在维持细胞基因组稳定性中的作用。方法 采用shRNA技术构建4E-BP1基因沉默的细胞模型；采用60 Co γ射线室温照射处理HepG2细胞；组蛋白H3 Ser10磷酸化分子标记物(M期细胞)结合流式细胞术,
【机 构】
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南华大学公共卫生学院,湖南衡阳421000 军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京100850
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目的 本研究进一步确定真核翻译起始因子4E-结合蛋白1(4E-BP1)磷酸化在电离辐射细胞中对蛋白质翻译的调节作用以及电离辐射细胞中G2/M检查点和纺锤体结构检查点的功能,研究磷酸化4EBP1在维持细胞基因组稳定性中的作用。方法 采用shRNA技术构建4E-BP1基因沉默的细胞模型；采用60 Co γ射线室温照射处理HepG2细胞；组蛋白H3 Ser10磷酸化分子标记物(M期细胞)结合流式细胞术,实时监测γ射线照射诱发DNA损伤细胞的细胞周期进程改变；用微管破坏剂Nocodazole诱发细胞有丝分裂阻滞,从有丝分裂阻滞细胞比例及撤出Nocodazole药物后细胞恢复有丝分裂进程的时程变化,判断纺锤体结构检查点机制；细胞克隆形成实验检测细胞存活率；Western blot分析蛋白质的表达。结果 经4Gy照射HepG2细胞,T37/46位点磷酸化的4 E-BP1在照射后1～2h内降低,随后恢复至正常水平,S65位点的磷酸化在2～4h内表现下降的趋势。结论 电离辐射能够引起4E-BP1磷酸化的改变。
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