【摘 要】
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为建立一种快速检测猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的SYBR Green实时荧光定量PCR方法,本试验首先进行了PEDV全序列多重比较,然后,基于保守区序列,设计了一对检测PEDV特异性引物,通过RT-PCR、克隆、提取、纯化、定量分析等步骤制备标准品.经优化反应条件建立标准曲线,用PCR和其它常规方法对其特异性、灵敏性、重复性进行比较评
【机 构】
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江西农业大学动物科技学院,江西南昌330045
【出 处】
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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会
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为建立一种快速检测猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的SYBR Green实时荧光定量PCR方法,本试验首先进行了PEDV全序列多重比较,然后,基于保守区序列,设计了一对检测PEDV特异性引物,通过RT-PCR、克隆、提取、纯化、定量分析等步骤制备标准品.经优化反应条件建立标准曲线,用PCR和其它常规方法对其特异性、灵敏性、重复性进行比较评估,评估结果表明所建立的SYBR Green实时荧光定量PCR方法具有良好特异性,对PRRSV、CSFV、TGEV等常见肠道病原体没有交叉扩增反应;该方法敏感性高:可达102拷贝/μL.应用所建立的方法对江西省125份腹泻样品进行检测,PEDV检出率为92.8％,较常规RT-PCR检测方法76.8％的检出率高16％;该方法重复性好:对检测结果统计学分析表明批内、批间试验的变异系数分别为0.19％～0.53％和0.3％～2.1％.该试验所建立的实时荧光定量PCR方法特异性强、灵敏度更高,重复性好,且简单、快速,可用于PEDV早期感染猪群的诊断和定量分析及流行病学调查.
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