一种高效的小鼠胚胎双重荧光染色方法

来源 :中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十四届学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:leeo_1987
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尝试改进并建立一种较可靠的、适合小鼠胚胎质量参考鉴定的双重荧光染色(细胞计数)方法。与传统方法相比,本实验中抗羊脾细胞抗血清的最佳稀释度为1□5,作用时间为30 min。豚鼠补体最佳稀释度为1□5,两种分染染料H33342和PI的工作浓度均降低至5.3 μg/mL便可着色,染色时间延长至90 min,加大了染料工作液中柠檬酸钠的浓度,并在计数观察前增加压片这一步骤。染色过程中应注意避免血清物质对抗体补体的不良影响以及避光和快速的操作。双重荧光染色后小鼠胚胎内细胞团(ICM)细胞着色为蓝色,滋养层(TE)细胞着色为粉红色,数目清晰可辨。此方法可以作为一种简洁有效的小鼠胚胎质量鉴别参考方法。
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[目的]建立B超介导的妊娠奶牛早期胎儿性别诊断的方法。[方法]使用线阵和凸阵探头经直肠进行扫描,以脐带根部区域是否存在生殖结节作为鉴别标志,同时以乳腺或阴囊作为辅助标志来诊断早期胎儿的性别。对部分诊断为雄性胎儿采用宫注前列腺素法进行诱导流产,分析流产对奶牛生产和繁殖的影响。[结果]检测了37头妊娠50 70 d(试验组Ⅰ)的奶牛,其中:诊断是雄性胎儿的有16头,出生15头公犊,1头母犊;诊断是雌性
试验研究了二甲基亚砜(Dimethyl Sulphoxide,DMSO)和胎牛血清(Fetal Boyine Serum,FBS)对绵羊孤雌胚胎发育能力的影响。结果表明,化学激活液中DMSO的含量增加到1%,卵裂率和囊胚率显著提高(P<0.01);在有糖的胚胎发育液中。FBS添加量为10%,囊胚率显著提高(P<0.05)。
在牛胚胎培养液中分别添加5、10、15和20μg/L神经生长因子(NGF),观察其对牛体外受精和孤雌激活胚胎体外发育及颗粒细胞增殖的影响。在培养液中添加10μg/L的NGF,可显著提高牛卵母细胞体外受精囊胚率(35.0% vs 50.0%,P<0.05),也显著提高牛卵母细胞体外孤雌发育囊胚率(43.9%vs56.3%,P<0.05),但对卵裂率及囊胚孵化率影响不明显(P>0.05)。5u g/L
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单精子细胞质内注射(Intracytoplasmic sperm injection,ICSI),是显微受精的一种,以其高效性已广泛应用于生产、科研和医学的诸多领域。本文从关于第一极体,精子制动、精子顶体、与IVF的关系、安全性等五方面,探讨了ICSI技术的研究进展,并简要地展望了其发展前景。
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为研究胚胎发育阶段与受体移植时间同步性的关系,本试验将供体奶牛配种后7-7.5d获得的不同发育阶段的常规胚胎和性别鉴定胚胎分别移植给发情后不同天数的受体,统计其妊娠率。实验结果如表所示,常规桑椹胚在发情后7d、7.5d移植妊娠率(59.18%,56.25%)较高于8d妊娠率(40%),但各组之间无显著差异(P□0.05);早期囊胚在发情后7.5d移植妊娠率(71.43%)显著性高于发情后7d(43