基因枪免疫小鹅瘟VP3基因疫苗在小鼠体内动态表达

来源 :中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qqq398705749
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将小鹅瘟病毒(GPV)VP3基因疫苗(pcDNA-GPV-VP3)以每只6μg、3μg、1μg三个剂量分别用基因枪轰击免疫三组BALB/c小鼠,通过免疫组织化学法检测pcDNA-GPV-VP3在BALB/c小鼠组织中的动态表达规律。结果:免疫后3h即可在三个基因枪免疫组免疫部位的皮肤细胞细胞核中发现pcDNA-GPV-VP3的表达产物,于1d-1wk表达产物最多,表达可以持续到9wk;1wk-4wk内心、肾、肝细胞细胞核中可以检测到pcDNA-GPV-VP3的表达产物;pcDNA-GPV-VP3表达产物的量与免疫剂量之间较弱的正比关系。研究表明:通过基因枪免疫小鼠后,pcDNA-GPV-VP3可在小鼠体内快速地表达;基因枪免疫小鼠的方法具有高效和可靠的优点。
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将小鹅瘟病毒(GPV)VP3基因疫苗(pcDNA-GPV-VP3)分别以每只200μg、100μg、50μg肌肉注射和6μg、3μg、1μg基因枪轰击的方法免疫六组BALB/c小鼠;以PBS和空载体pcDNA3.1(+)为对照,于免疫后不同时间采取小鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑、肠和免疫部位肌肉,应用荧光定量PCR检测pcDNA-GPV-VP3在各组织器官中的分布及含量情况。检测结果表明:pcDNA
将小鹅瘟病毒(GPV)VP3基因疫苗(pcDNA-GPV-VP3)分别以每只200μg、100μg、50μg肌肉注射和6μg、3 μg、1μg基因枪轰击的方法免疫六组BALB/c小鼠,通过免疫组织化学法检测pcDNA-GPV-VP3在BALB/c小鼠体内的动态表达规律。结果:在肌肉注射三组中,表达产物在心、免疫部位肌肉、肾和肝细胞细胞核中被检测到,基因疫苗的剂量和表达产物的量呈现一定的正相关性;基
以提取的斑点叉尾鲴脑垂体总RNA为模板,用Oligo(dT)作为引物逆转录(RT)出cDNA后以生长激素的特异引物进行PCR扩增,成功扩增出其生长激素基因。将此基因克隆于pMD18-T vector并经质粒PCR和Xho Ⅰ/EcoR Ⅰ双酶切鉴定后命名为pMD18-GH.测序结果显示pMD18-GH中含有完整的斑点叉尾鮰生长激素基因开放阅读框,其大小为603bp,编码200个氨基酸残基。推导的生
将小鹅瘟病毒(GPV)VP3基因疫苗(pcDNA-GPV-VP3)以每只200μg、100μg、50μg三个剂量分别肌肉注射免疫三组BALB/c小鼠,通过免疫组织化学法检测pcDNA-GPV-VP3在BALB/c小鼠体内的动态表达规律。结果:表达产物在心、免疫部位肌肉、肾和肝细胞细胞核中被检测到,基因疫苗的剂量和表达产物的量呈现一定的正相关性。研究表明:pcDNA-GPV-VP3通过肌肉注射免疫小
本文应用大量生物信息学分析工具以及RNA斑点杂交技术对本实验室在构建鸭瘟病毒(DPV)CHv株基因文库时新发现的dUTPase基因(GenBank登录号DQ486149)进行了分子特性及转录时相分析。研究表明:该基因大小为1344bp,编码477 aa,包含dUTPase家族蛋白的5个保守motifs,排列形式3-1-2-4-5具备Ⅱ型dUTPase的典型特征。DPV CHv dUTPase基因在
通过光镜、电镜、DNA Ladder法、流式细胞术、荧光染色对鸭肿头出血症病毒(DSHDV)诱导鸭胚原代成纤维细胞(DEF)凋亡情况进行检测。结果显示,光镜可见细胞形态学上出现细胞皱缩,染色质浓染边移;电镜观察到细胞胞浆浓缩,细胞核染色质凝聚、部分形成凋亡小体;荧光染色结果显示,在感染后24h有激发绿色荧光的凋亡细胞出现,随着时间的推移,激发红色荧光的死亡细胞数量增多;DNA Ladder检测到感
为了获得适宜鸭肿头出血症病毒(DSHDV)体外培养的细胞,开展了DSFIDV强毒株在鸭胚成纤维细胞(DEF)适应性和增殖特性的研究。实验表明,DSHDV强毒株经尿囊腔接种10日龄鸭胚传3代,取第3代尿囊液接种DEF,第1代培养至120h DEF出现变圆,脱落,出现了少量蚀斑;第2代培养至96~120 h DEF形成大量圆形或椭圆形的典型蚀斑,第3代培养至72~96h DEF形成了典型蚀斑;此后传代
DPV经过鸭胚成纤维细胞增殖、反复冻融、差速离心、蔗糖密度介质离心制备纯化抗原,建立了用于检测鸭血清中抗DPV特异性IgG抗体的间接ELISA方法,并对该法进行了标准化研究,确定了最佳工作条件。在此基础上研制了相应的检测试剂盒并对盒内各组分的保存条件、质量控制以及试剂盒的特异性、重复性等方面进行研究。结果表明:4.751μg/孔的纯化DPV抗原包被反应板可获得良好特异性和敏感性,1:100稀释的待
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