【摘 要】
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为比较不同禽白血病病毒(ALV)抗原ELISA检测试剂盒和胶体金试纸条的灵敏度，我们将A、B、J三种不同ALV亚群分别以50 TCID50、 100 TCID50、 500 TCID50三种剂量接种培养于DF1细胞上，接种后第2-8天每天收取上清，每份上清用三种不同的抗原ELISA检测试剂盒(A、B、C)和两种胶体金试纸条(D、E)同时检测.结果显示，三种亚群三种剂量分别应用A、B、C三种ELIS
【机 构】
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山东农业大学动物医学院,山东泰安,271018 中国农业科学院家禽科学研究所,江苏扬州,22512
【出 处】
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2016第六届中国兽药大会(中国畜牧兽医学会动物药品学分会第五届全国会员代表大会暨2016学术年会、中国微生物学会兽医微
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为比较不同禽白血病病毒(ALV)抗原ELISA检测试剂盒和胶体金试纸条的灵敏度，我们将A、B、J三种不同ALV亚群分别以50 TCID50、 100 TCID50、 500 TCID50三种剂量接种培养于DF1细胞上，接种后第2-8天每天收取上清，每份上清用三种不同的抗原ELISA检测试剂盒(A、B、C)和两种胶体金试纸条(D、E)同时检测.结果显示，三种亚群三种剂量分别应用A、B、C三种ELISA检测试剂盒灵敏度基本一致，但在针对三种亚群的个别剂量时B试剂盒灵敏度略高于A和C；两种胶体金试纸条检测结果完全一致，但其灵敏度均比ELISA试剂盒低，检出时间延后1-2天.同时应用ELISA试剂盒A、B和胶体金试纸条D、E对60枚种蛋蛋清进行了检测，结果显示胶体金试纸条检出率远低于ELISA试剂盒检出率，在某些应用方面还无法完全替代ELISA检测试剂盒.本研究为广大种鸡场开展禽白血病净化选择灵敏度高操作简便的检测方法及其适用范围提供了借鉴.其次，我们探索了核酸杂交技术在测定J亚群禽白血病病毒(ALV-J)细胞半数感染量(TCID50)中的可行性，将ALV-J传染性克隆rNX0101株以10倍梯度稀释后按常规方法接种已长满单层鸡胚成纤维细胞(CEF)的96孔板，在维持7天后收集细胞培养上清.上清液部分按照试剂盒说明书进行p27抗原的ELISA检测，另一部分提取RNA后以鸡致病性外源性禽白血病病毒特异性核酸探针交叉斑点杂交检测试剂盒进行Dot-blot检测，每孔中细胞固定后以ALV-J特异性单抗进行IFA检测，确定病毒感染孔后按照Reed-Muench法分别计算三种方法测定的TCID50.结果显示ELISA法、IFA法和Dot-blot法在确定病毒感染中能够相互验证和补充，三种方法测定该病毒在CEF上的TCID50分别为10-4.7TCID50/0.1 ml、 10-5.2 TCID5d0.1ml和105.3TCID50/0.1 ml.本研究结果表明Dot-blot法测定ALV-J的TCID50是可行的，且IFA比ELISA具有更高的灵敏度.不仅能够排除内源性的干扰，并且比ELISA和IFA具有更高的灵敏度.
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