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目的:利用RNA干扰稳定筛选抑制技术,降低端粒酶逆转录酶(hTERT)基因表达,探讨靶向hTERT基因RNA干扰对胃癌细胞增殖的抑制效应.
方法:设计靶向hTERT基因的小干扰RNA,构建重组表达质粒pGenesil-shRNA-hTERT,导入胃癌细胞系SGC7901细胞株,经G418筛选,建立siRNA-hTERT稳定表达细胞株;应用realtimeRT-PCR、MTT和PCR-TRAP方法检测SGC7901细胞pGenesil-shRNA-hTERT稳定表达抑制组和未处理对照组hTERT基因表达、端粒酶活性以及瘤细胞增殖的变化.
结果:pGenesil-shRNA-hTERT稳定表达抑制组SGC7901细胞株RNA干扰活性持续稳定存在;其hTERTmRNA表达和端粒酶活性明显降低;瘤细胞增殖抑制率第2、8和15代分别为(49±1.20)