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目的:生物来源的支架材料用于组织修复成为生物材料研究和应用的热点之一.目前,临床上常使用自体或异体来源的髌腱、腘绳肌腱、股四头肌腱和髂胫束等生物来源材料修复韧带缺损,但仍存在来源受限、修复后膝关节稳定性差、手术并发症等缺点.因此,探索使用来源更加广泛、手术固定简便的脱钙脱细胞皮质骨(主要成分是Ⅰ型胶原)作为韧带修复的替代物具有潜在的应用价值.本实验对异种脱钙脱细胞皮质骨的组织学、形态学及力学性能进行表征,旨在为研发修复韧带缺损的材料提供实验依据.
方法:取新鲜新生小牛四肢骨,沿力线方向加工成长5cm,宽4mm的全厚皮质骨。利用0.5NHCl对其脱钙,甲醇:乙醇(1:1)脱脂,1%TritonX-100, 0.5%脱氧胆酸钠脱细胞,制备脱钙脱细胞皮质骨支架。使用原子吸收方法检测支架的脱钙率;H&E和DAPI观察支架脱细胞效果,进一步用Quant-iTTM PicoGreen(R)dsDNA Assay Kit定量检测支架中DNA残留量;SEM,TEM观测其形态变化;生物力学试验机行单轴拉伸实验测定其力学特性。
结果:皮质骨经脱钙处理后,脱钙率达99%;脱细胞处理后,组织学上未见明显的细胞残留,DNA检测证实脱细胞效果明显;形态学检测表明支架材料结构未发生明显变化;支架的力学性能满足韧带修复的基本要求。
结论:脱钙脱细胞皮质骨支架不但具备基本的力学性能,而且脱除了原有的钙含量和细胞残留,可望用于韧带修复的支架材料。