玉米CRISPR-Cas9高效基因组编辑系统的建立

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基于CRISPR-Cas9系统的基因编辑工具近年来在医疗、农业等领域展现巨大的应用潜力。然而在玉米等部分作物中基于农杆菌转化载体进行基因组编辑的效率偏低,一定程度影响到该技术的利用。我们选择玉米DMC1基因的启动子构建DPC(DMC1 promoter-controlled)CRISPR/Cas9系统,运用该系统在玉米中实现了高效的基因组编辑。我们发现凡是抗性愈伤组织靶位点均发生基因组编辑,T0代植株中出现60-70%左右的纯合或双等位的突变体,其余为杂合或嵌合的突变体植株;这些纯合或双等位突变体植株(再生自一个抗性愈伤组织)含有不同的突变alle1e类型;产生的突变能够稳定遗传到T1代,并且新的突变allele类型在T1代也被发现。通过全基因组测序分析,在预测的1000多个潜在脱靶位点没有发现脱靶突变。对多个基因靶点的编辑实验,验证了该载体系统的高效性。这一技术为玉米功能基因组研究提供了快速高效的方法,同时DMCl基因在进化中非常保守,该基因的启动子有潜力在其他作物基因编辑中发挥类似作用。
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