液相色谱被公认为分离蛋白的最有效方法之一。用两根色谱柱进行的二维液相色谱较用一根色谱柱的一维色谱分离效果高。二维液相色谱可用离线和在线法操作，前者要求样品溶液进行缓冲溶液交换、组分浓集、耗时长，后者存在目标蛋白损失过多等缺点。本文对这一全新的方法进行介绍和评述：①用一根色谱柱代替由两根色谱柱进行的二维液相色谱分离；②克服现有二维液相色谱的上述缺点，是一种全新、理想的蛋白快速分析法：③在组装成的“在线蛋白二维快速制备色谱仪”上，使从样粗蛋白溶液，在一具正压的封闭的体系中进行的蛋白的多步液相色谱纯化和除盐，防止环境污染、目标蛋白定量地从一维转移到二维分离、如此方式提高蛋白组的质量会收率，并以典型事例说明之。现在该法已用于“在线蛋白快速纯化和制备”，将来可望用于大规模生产。