【摘 要】
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目的 检测microRNA-204(miR-204)在乳腺癌细胞中的表达情况,和对乳腺癌细胞生物学特性的影响,并初步探索miR-204的作用机制,为乳腺癌的治疗提供新方法和新策略.方法 利用定量实时PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测miR-204在人正常乳腺细胞(Hs 578Bst)和乳腺癌细胞系(MCF7、MDA-MB-415、MDA-MB-231
【机 构】
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南通大学实验动物中心,江苏南通,226001
【出 处】
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华东地区第十四届实验动物科学学术交流会
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目的 检测microRNA-204(miR-204)在乳腺癌细胞中的表达情况,和对乳腺癌细胞生物学特性的影响,并初步探索miR-204的作用机制,为乳腺癌的治疗提供新方法和新策略.方法 利用定量实时PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测miR-204在人正常乳腺细胞(Hs 578Bst)和乳腺癌细胞系(MCF7、MDA-MB-415、MDA-MB-231)中的表达情况.在MDA-MB-231细胞中转染miR-204mimic和inhibitor后48h,qRT-PCR检测细胞中miR-204表达变化；MTT分析法检测miR-204对乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞活力的影响.流式细胞仪分析miR-204对MDA-MB-231细胞增殖、凋亡的影响.采用transwell侵袭小室分析法检测miR-204对MDA-MB-231细胞迁移的影响.利用荧光报告酶系统检验EphB是miR-204调控靶基因,并通过Western blot方法检测miR-204对细胞中EphB蛋白表达的影响.结果 qRT-PCR检测结果显示：miR-204在乳腺癌细胞中表达下调,MTT和流式细胞仪分析结果显示：与对照组相比,miR-204 mimic转染组的细胞活力显著降低,增殖细胞比例显著减少,凋亡细胞比例显著增加.transwell侵袭小室分析结果显示：miR-204 mimic转染组穿过transwell侵袭小室的细胞显著减少,而miR-204 inhibitor的作用则相反,能够显著促进细胞增殖和迁移,显著抑制细胞凋亡.Western blot结果显示：miR-204显著抑制EphB蛋白的表达.结论 miR-204在乳腺癌细胞中表达下调,通过负调控EphB,发挥着抑制乳腺癌细胞增殖和迁移,促进细胞凋亡,其具体机制有待进一步深入研究.增强miR-204表达的治疗策略有望使乳腺癌患者受益.
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