庆大霉素肾毒性小型猪模型中自噬和凋亡的变化

来源 :中国工程院医药卫生学部肾脏病前沿论坛、第十三届华北地区暨北京市肾脏病学术年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhangqing1226
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  本研究建立中国实验用小型猪庆大霉素肾毒性模型,以及探讨肾毒性的发生机制,尤其是凋亡和自噬在此模型中的变化。同时,我们研究庆大霉素对肾组织炎症和氧化应激的影响。实验分为两组:(1)正常对照组:每日肌肉注射生理盐水2ml/kg体重,(2)庆大霉素模型组,每日肌肉注射庆大霉素80mg/kg体重。连续注射10天。第11天注射戊巴比妥钠,处死动物。留取血液标本测定肾功能(肌酐、尿素氮);用PAS染色观察肾脏病理变化;用TUNEL法检测细胞凋亡;用比色法检测肾组织中NO、丙二醛(MDA),总超氧化物歧化酶(T-SOD),谷胱甘肽还原酶(GR),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX),过氧化氢酶(CAT),Caspase3,8和9活性水平。研究结果显示,与对照组相比,庆大霉素模型组小型猪血肌酐和尿素氮水平显著升高,肾小管上皮细胞凋亡增加,庆大霉素肾毒性模型组Caspase3,8和9活性显著升高,TUNEL染色显示模型组凋亡细胞显著增多。同时,与对照组相比,模型组小型猪肾脏Atg4b,线粒体自噬标志物Bnip3,Parkin和Ambra1蛋白表达显著下降,线粒体自噬感受调节蛋白PINK1,自噬体标志物LC3,自噬流量标志物p62/SQSTM1和多聚泛素聚集体蛋白(polyubiquitin aggregates)表达显著升高。此外,NO和脂质氧化产物丙二醛含量增加,抗氧化酶过氧化氢酶(CAT),总超氧化物歧化酶(T-SOD),谷胱甘肽还原酶(GR),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性显著降低。与对照组相比,模型组小型猪肾脏NF-κB的蛋白质水平和 MCP-1/CCL2,MIP-2/CXCL2,CCL-5,VCAM,IL-6,ICAM-1/CD 54等mRNA水平显著升高。上述结果表明庆大霉素导致肾脏自噬功能下降,氧化损伤加重,凋亡和炎症反应增加。在本研究中,我们成功建立了庆大霉素肾毒性小型猪模型,并发现自噬,凋亡,氧化损伤和炎症在肾毒性的发生中具有重要作用。
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