【摘 要】
：
糖基转移酶(Glycosyltransferases,GTs)作为催化糖链合成的工具酶,在酶法或化学酶法合成糖缀复合物和寡糖技术体系发挥重要作用.优良催化特性GT工具酶的缺乏,是制约化学
【机 构】
：
山东大学药学院生化与生物技术药物研究所山东大学微生物技术国家重点实验室山东大学药学院生化与生物技术药物研究所;山东大学国家糖工程技术研究中心
【出 处】
：
2015中国酶工程与糖生物工程学术研讨会
论文部分内容阅读
糖基转移酶(Glycosyltransferases,GTs)作为催化糖链合成的工具酶,在酶法或化学酶法合成糖缀复合物和寡糖技术体系发挥重要作用.优良催化特性GT工具酶的缺乏,是制约化学酶法规模化制备活性糖缀复合物的瓶颈问题之一.发现全新的天然GT,或者利用蛋白质工程改造已有GT是突破这一瓶颈问题的有效手段.分子定向进化(molecular directed evolution)属于蛋白质工程中的非理性设计范畴,是指建立在体外模拟自然进化过程基础上的由人工突变基因而达到操纵蛋白质结构和性质的过程.灵敏、准确的高通量筛选系统是GT分子定向进化策略能够实施的两大必要条件之一.本课题组建立了偶联酿酒酵母UDP水解酶的Leloir型GT反应高通量筛选体系.首先,通过对S.cerevisiae UDP水解酶YND1(yeast nucleoside diphosphatase, YND1, GenBank： NC_001137.3 REGION： 160550.162442,SGD ID：S000000807)特定跨膜区域的理性突变,实现YND1在大肠杆菌中的可溶性重组表达.将Leloir型GT反应与重组YND1对nucleoside diphosphate (NDP)水解活性的偶联,通过对"两步"反应产物(游离硫酸根)的特异性检测,建立了一个Leloir型GT高通量检测体系.此外,以大肠杆菌肝素骨架合成酶KfiA为模式酶分子,初步验证了偶联YND1对化学酶法寡糖合成步骤的效率有明显的促进作用.
其他文献
目的 研究探讨不同聚合度、不同脱乙酰度的壳寡糖对猪蓝耳病灭活疫苗(PRRSV)的免疫佐剂活性.方法 不同聚合度和脱乙酰度的壳寡糖COS(聚合度2-8,脱乙酰度＞95％)、COSNAC(聚合
Deep-sea and polar sea regions are known extreme marine environments.A lot of microorganisms survive there, adapting to the extreme environments with various st
脂肪酶(EC 3.1.1.3)是重要的工业用酶,广泛应用于食品、饲料、油酯化工、医药、生物能源和环境等领域.但目前具有工业化生产潜力的脂肪酶基因工程菌资源有限.毕赤酵母表达系
β-羟基腈是医药与化工行业中的重要中间体,其中一种重要的代表就是6-氰基-3,5-二羟基己酸叔丁酯,它是合成阿托伐他汀的关键手性中间体.利用卤代醇脱卤酶催化6-氯-3,5-二羟基
来自微生物的酶往往具有功能多重性,表现为功能集成。糖苷水解酶家族13中的20亚家族(新普鲁兰酶亚家族)针对α-糖苷键具有多种催化功能,包括水解α-1,4、α-1,6糖苷键、
饲用酶制剂的功效已被畜牧水产养殖业和饲料工业广泛接受,是生物酶产业未来发展的具有重要前景的产品.目前,饲用酶制剂筛选和研制过程中没有采用实际饲料原料作为底物,生产的
与酶切-连接构建重组质粒方法不同,本文建立了一种不通过限制性内切酶酶切的重组质粒构建方法——二步PCR.第一步常规PCR,用正向引物(IF)和反向杂合引物(IR)扩增黑曲霉木
The PNP/6-methylpurine 2-deoxyriboside (6MePdR) system is an efficient gene-directed enzyme prodrug therapy system with significant antitumor activities.In this
Aspergillus fumigatus is one of the major sources of cellulases, but its cellulolytic protein expressions on lignocellulosic biomass are still need to be fu
本研究以超高效液相色谱-质谱(UHPLC-MS)为核心、结合荧光标记、外切糖苷酶及MALDI-TOF技术,对人乳、牛乳及婴儿配方奶粉中全部糖蛋白N-链寡糖组的结构进行了解析,比较了不同