【摘 要】
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乙醇脱氢酶在昆虫代谢、蜕皮及变态发育中起着重要作用.以鸡沙门氏菌诱导家蝇幼虫构建的抑制性消减文库中筛选到的未知功能基因为研究对象,应用RACE技术(Rapid amplification of cDNA ends,RACE)获得MADH基因的全长序列；测序分析后应用生物信息学软件对MADH的ORF(open reading frame)序列进行分析并预测其蛋白质功能,并进一步将克隆获得的MADH全
【机 构】
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吉林农业大学动物科学技术学院,吉林长春130118
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨
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乙醇脱氢酶在昆虫代谢、蜕皮及变态发育中起着重要作用.以鸡沙门氏菌诱导家蝇幼虫构建的抑制性消减文库中筛选到的未知功能基因为研究对象,应用RACE技术(Rapid amplification of cDNA ends,RACE)获得MADH基因的全长序列；测序分析后应用生物信息学软件对MADH的ORF(open reading frame)序列进行分析并预测其蛋白质功能,并进一步将克隆获得的MADH全长基因与原核表达载体pET-28a连接,构建重组表达质粒MADH-pET-32a；将重组表达质粒MADH-pET-28a转化至E.coli BL21 (DE3)感受态细胞中,进行诱导表达和SDS-PAGE电泳分析；利用亲和层析法对表达的融合蛋白进行纯化,然后对纯化后的乙醇脱氢酶MADH进行体内、体外的解乙醇活性进行检测.结果显示,克隆到了一个807bp的乙醇脱氢酶基因,与昆虫25KDa蛋白具有很高的同源性为72.01％；该基因的原核表达产物具有较高的乙醇脱氢酶活性,比活力为0.203 U/mg；采用静脉注射的方法对小鼠进行给药后,给小鼠灌服55度白酒,可有效预防小鼠醉酒,与对照组相比,MADH融合蛋白延长了醉酒时间,缩短了醒酒时间.本研究不仅丰富了昆虫ADH家族,更为新的解酒药和解酒食品开发提供了新的思路和方法.
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