【摘 要】
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几丁质的合成与降解在甲壳动物的蜕皮过程起重要的作用.几丁质酶(EC3.2.1.14)可降解几丁质,促使甲壳动物生长发育的正常进行.本实验室前期通过对脊尾白虾转录组测序及分析,有6条序列属于几丁质酶基因.为得到具有较高酶活的几丁质酶,并研究其对甲壳动物蜕皮过程的影响,本研究在脊尾白虾肝胰腺中通过离子交换层析和分子筛层析等方法提取并纯化得到两种天然几丁质酶,分别命名为EcChi1和EcChi2.它们的
【机 构】
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中国科学院海洋研究所 青岛 266071;中国科学院大学 北京 100049 中国科学院海洋研究所
【出 处】
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“全球变化下的海洋与湖沼生态安全”学术交流会
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几丁质的合成与降解在甲壳动物的蜕皮过程起重要的作用.几丁质酶(EC3.2.1.14)可降解几丁质,促使甲壳动物生长发育的正常进行.本实验室前期通过对脊尾白虾转录组测序及分析,有6条序列属于几丁质酶基因.为得到具有较高酶活的几丁质酶,并研究其对甲壳动物蜕皮过程的影响,本研究在脊尾白虾肝胰腺中通过离子交换层析和分子筛层析等方法提取并纯化得到两种天然几丁质酶,分别命名为EcChi1和EcChi2.它们的分子量大概分别为65 kDa 和44 kDa,比活力分别为1305.97 U mg-1和28.69 U mg-1.对比活力较高的EcChi1进行酶学特征分析,其最适温度为37oC,最适pH分别为pH 4.0.Co2+,Fe3+,Zn2+,Cd2+,和Cu2+对其几丁质酶活性具有明显的促进作用.对胶体几丁质底物的Km和Vmax值分别为4.98 mg ml-1、32.46 U mL-1 h-1.对两种几丁质酶进行LC-ESI-MS/MS质谱鉴定,结合课题组已有的脊尾白虾转录组数据,经过分析及PCR扩增,获得了4条几丁质酶的全长cDNA序列,并分别构建了含有以上4种几丁质酶基因编码成熟肽序列的分泌性表达载体,获得了4种分泌表达几丁质酶的基因工程菌株.这为进一步制备基因工程蛋白,并将得到的天然蛋白与重组蛋白进行结构与功能上的比对,通过生物学信息学对酶活位点的预测结果,进行几丁质酶定点突变的研究,初步阐释几丁质酶的酶解机制奠定了良好的基础.
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