【摘 要】
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目的 DNA 损伤反应(DNA Damage Response,DDR)可以保持基因组的稳定性. DNA 损伤检测点蛋白1(Mediator of DNA damage checkpoint protein 1,MDC1)通过直接或间接地与多种DNA 损伤效应因子相互作用的方式,在DDR 机制中发挥关键作用.DNA 损伤发生以后,DNA 损伤位点组蛋白H2A 被激活的ATM 磷酸化形成gH2AX.
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目的 DNA 损伤反应(DNA Damage Response,DDR)可以保持基因组的稳定性. DNA 损伤检测点蛋白1(Mediator of DNA damage checkpoint protein 1,MDC1)通过直接或间接地与多种DNA 损伤效应因子相互作用的方式,在DDR 机制中发挥关键作用.DNA 损伤发生以后,DNA 损伤位点组蛋白H2A 被激活的ATM 磷酸化形成gH2AX.gH2AX 可以被MDC1 识别,从而MDC1 作为一种支架蛋白通过招募各种DNA 损伤反应因子介导DNA 损伤修复.其中最重要的一种DNA 损伤反应因子,即MRE11-RAD50-NBS1(MRN)复合物,通过MRN 的NBS1 亚基与MDC1 N 端的多个酸性序列基序的直接相互作用并且结合；另一种是RNF8,是一种具有FHA 结构域的E3 泛素连接酶.DNA 双链断裂(DNAdouble-strand breaks,DSB)发生时,RNF8 可以通过与MDC1 中一段保守的苏氨酸残基相互结合促进招募DNA 损伤应答影子如53BP1、BRCA1 等,进行同源重组(HR)修复和非同源末端连接(NHEJ)修复.然而,MDC1 被招募到DNA 受损部位的机制仍然普遍难以捉摸.方法 将癌细胞用含有10％FBS 的DMEM 或RPMI-1640 培养基,在含有5％CO2、37℃恒温环境培养.用共免疫沉淀,Western blot(WB),免疫荧光(IF),邻近连接测定(PLA)检查MDC1 和遍在蛋白特异性肽酶39(USP39)之间的相互作用.通过流式细胞术检测同源重组(HR)修复和非同源末端连接(NHEJ)效率.通过电离辐射(IR)诱导DNA 损伤并用WB 和IF 检测.结果 我们鉴定出一种高度保守的蛋白质USP39,它可与MDC1 相互作用并募集到DNA 损伤位点.此外,USP39 的敲低导致IR 诱导的γ H2AX 聚集点和MDC1 聚集点的形成受损,损害HR 修复和NHEJ修复,促进放射敏感性和基因组不稳定性.结论 总之,我们揭示了MDC1 和USP39 之间以前未知的相互作用,并提示USP39 作为MDC1 在促进DDR 和维持基因组稳定性方面的新调节分子.
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