枯萎病是困扰热区蔬菜生产的最严重问题之一,由于热带亚热带地区常年高温多雨,瓜菜复种指数高,连作连茬频繁,常常造成枯萎病流行成灾,导致作物大幅减产,甚至绝收,严重制约了海南省蔬菜产业的进一步发展。近年来,我们对热区重要蔬菜枯萎病的发生与流行、致病分子机理、遗传多样性及综合治理方面进行了初步研究。对海南各主要蔬菜产区的土传病害进行了多次普查,共采集各类土传病害标本325份,分离获得122个病源菌株,拍摄各类病害图片1 000多张,基本摸清了海南各主要蔬菜产区枯萎病种类构成、发生为害程度。设计和发展了一套西瓜枯萎病菌环介导等温扩增( LAMP)定性和定量检测技术,相对于常规的PCR检测技术,这套基于LAMP的检测技术具高特异性和抗干扰能力,反应体系比较稳定可靠,灵敏度高,检测过程简单快速而且高效,无需昂贵仪器。该技术的发展为将来进行田间样品的高通量检测、鉴定及西瓜枯萎病的田间消长规律监测提供了坚实的技术支持。运用农杆菌介导法进行了转化体系的优化和突变体库的构建,为将来该菌致病相关基因的分离鉴定及关键致病基因的功能挖掘打下了良好基础。至今已经获得了3 500多个抗潮霉素的阳性转化子,其中,近300个转化子菌落生长、颜色或产孢表型发生明显变化。现正通过Tail-PCR获取一些重要突变体候选基因的全长序列,相关突变体的致病性测试也正在进行中。此外,西瓜枯萎病菌小RNA测序及致病相关内源小RNA的功能分析工作也正在进行中。在枯萎病的综合防控方面,我们围绕基于生物防治和嫁接技术相结合的防控策略进行了初步研究。进行了根围拮抗菌和内生菌的分离和筛选工作,室内对峙培养及人T接种盆栽试验结果表明,DSI/3BS(5)对西瓜枯萎病的抑制效果最为明显,显示良好的应用潜力。构建了基于滴灌系统的土壤消毒技术规程,并成功应用于甜瓜土传病害的有效防控。与海南省农业科学院等兄弟单位合作,开展了嫁接砧木对枯萎病的抗性评估工作。