目的甲型血友病是一种X连锁隐性遗传的凝血功能障碍性疾病,该病的致病基因突变类型具有明显的遗传异质性,其中第22内含子倒位突变最为常见。现国际上主要采用LD-PCR技术来检测该突变,但该技术存在缺点。2005年国际上报道了检测该突变热点的新方法:倒位-PCR技术。该方法弥补了LD-PCR技术的缺点,但是该方法存在步骤繁琐、检测时间为56个小时耗时较长的缺点,该研究针对此缺点优化和改进该技术并直接应用于检测第22内含子倒位突变的产前基因诊断,使得该方法更适用于临床。变性高效液相色谱技术是一种准确、灵敏、经济、高通量的检测突变的方法,现未有应用该技术作HA产前诊断的报道,所以该实验旨在建立利用DHPLC技术筛查非倒位患者14外显子突变热点方法来提高甲型血友病的产前基因诊断率,防止新患儿出生、降低该病发病率,减轻家庭和社会负担,对优生优育有深远意义。方法该研究收集了14个无血缘关系的HA家系,其中3例取得胎儿脐静脉血作产前诊断,5例家系符合连锁分析条件。该研究优化并改良了I- PCR技术并利用改良后的I-PCR技术检测第22内含子倒位突变,非倒位突变的患者采用DHPLC技术对14外显子进行点突变的筛查,最后对未能检测突变又符合连锁分析条件的,联合BclⅠ、HindⅢ及St14(DXS52)位点作连锁分析。结果利用改良后的Ⅰ-PCR技术在5个家系中检出了5名患者存在第22内含子倒位,联合临床脐静脉血凝血因子检测方法为其中2例孕妇进行产前基因诊断,检出2例正常男性胎儿,两胎儿出生后均证实符合产前诊断。采用DHPLC技术筛查14外显子点突变后,发现了2家系带有14外显子突变,其中一例为新发突变(c.3168-c.3187,del TGAGTTTAAAAAAGTGACAC),此家系胎儿产前诊断为患儿,已作人工流产终止妊娠。最后作连锁分析5例家系中有2个家系能提供多态性信息,成功为家系相关成员是否为携带者作诊断。结论该研究改良并优化了Ⅰ-PCR技术的技术条件,检测时间从56小时缩短到44小时,使得该技术更简便、快捷。该研究首次利用DHPLC技术应用于HA的产前基因诊断,检出一例新发突变,为该病的产前基因诊断提供了一种高效快速的检测方法。该研究联合应用I-PCR技术、DHPLC技术及连锁分析方法为14个甲型血友病家系中的9个家系作出了基因诊断。联合应用多种方法可提高甲型血友病基因诊断率。该研究提出了甲型血友病基基因诊断更科学的方案:联合应用I-PCR技术、DHPLC技术及连锁分析方法来提高甲型血友病基因诊断率。