【摘 要】
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目的:探讨下调miR-181b的表达对人甲状腺癌TPC1细胞功能的影响及其可能的靶向基因.方法:应用脂质体介导的方法将miR-181b inhibitor转染TPC1细胞后,通过MTT、细胞克隆、流式细胞仪分别检测细胞增殖和细胞凋亡的变化.将重组载体psiCHECK-2和miR-181b mimics共转染入人胚肾HEK293T细胞,应用双荧光素酶报告基因验证圆柱瘤基因(Cylindromatos
【机 构】
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同济大学附属上海市第十人民医院甲状腺乳腺科 上海 200072
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目的:探讨下调miR-181b的表达对人甲状腺癌TPC1细胞功能的影响及其可能的靶向基因.
方法:应用脂质体介导的方法将miR-181b inhibitor转染TPC1细胞后,通过MTT、细胞克隆、流式细胞仪分别检测细胞增殖和细胞凋亡的变化.将重组载体psiCHECK-2和miR-181b mimics共转染入人胚肾HEK293T细胞,应用双荧光素酶报告基因验证圆柱瘤基因(Cylindromatosis,CYLD)3’端非翻译区(3’-Untranslated Regions,3’-UTR)是否有miR-18lb的结合位点.Qrt-PCR检测转染miR-181b inhibitor后,CYLD成熟mRNA的变化.蛋白质印迹法检测转染miR-181b mimics转染后TPC1细胞中CYLD蛋白的表达.
结果:MiR-181b inhibitor成功转染至TPC1细胞.与转染miR-181b inhibitor阴性对照(negative control,NC) (Inhibitor-NC)比较,miR-181b inhibitor转染组TPC1细胞的增殖抑制(P＜0.05=);miR-181b inhibitor转染组细胞凋亡较阴性对照组明显增加(P＜0.01); psiCHECK-2和miR-181b mimics共转染组HEK293T细胞的荧光素酶活性下降(P＜0.01),证实miR-181b与CYLD 3’-UTR可特异性靶向结合.与转染miR-181b inhibitor-NC组比较,miR-181b inhibitor转染组TPC1细胞中CYLD成熟mRNA水平和蛋白的表达水平明显增高(P＜0.05).
结论:下调miR-181b的表达可显著抑制人甲状腺癌TPC1细胞的增殖和促进人甲状腺癌TPC1细胞凋亡,这种作用可能是通过miR-181b靶向调节CYLD的表达而实现的.
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