【摘 要】
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溶酶体相关四次跨膜蛋白(LAPTM4B)在多种肿瘤组织中高表达,而在正常组织中低表达.它具有复杂的生物学功能,不仅与肿瘤细胞的增殖、侵袭和多药耐药有关,还参与了细胞内PI3K/AK
【出 处】
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第十五届全国临床肿瘤学大会暨2012年CSCO学术年会
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溶酶体相关四次跨膜蛋白(LAPTM4B)在多种肿瘤组织中高表达,而在正常组织中低表达.它具有复杂的生物学功能,不仅与肿瘤细胞的增殖、侵袭和多药耐药有关,还参与了细胞内PI3K/AKT信号通路的激活以及自噬的发生.本文旨在探讨LAPTM4B的转录调控机制。首先，通过PCR的方法扩增了LAPTM4B启动子区不同长度的5’端截短的DNA片段并重组进pGL3荧光报告质粒中，瞬时转染人乳腺癌细胞系MCF7，根据报告基因荧光素酶的活性来判断启动子不同区域的转录活性。随后，通过生物信息学的方法对筛选出的转录活性最强区域进行分析，搜索潜在的顺式作用元件。最后，人工合成包含顺式作用元件序列的寡核苷酸探针，并将其标记上生物素，与人乳腺癌细胞MCF7核蛋白提取物及CREB1单抗孵育后，进行凝胶迁移阻滞实验和超迁移实验，验证顺式作用元件和反式作用因子的结合。结果本研究确定了LAPTM4B基因转录活性的最强区域，证明了CREB1能与LAPTM4B启动子结合，并对LAPTM4B转录起到正调控作用，这为LAPTM4B的进一步研究及其作为肿瘤标志物应用于临床奠定了理论基础。
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