【摘 要】
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为研究鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白FliC 的生物学特性,利用PCR 方法扩增鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白FliC 基因,构建重组表达质粒pET-32a-FliC,经大肠杆菌Rosetta(DE3)表达、镍离子亲和层析法纯化后用SDS-PAGE 和Western-blot 方法分析.重组蛋白与巨噬细胞RAW264.7 共孵育,ELISA 和CCK-8 法分别检测巨噬细胞细胞因子和巨噬细胞增殖情况.重组蛋白免疫小鼠
【机 构】
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河南科技大学动物科技学院/洛阳市活载体生物材料与动物疫病防控重点实验室,河南 洛阳 471001
【出 处】
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中国兽医病理学2017年学术研讨会暨兽医病理学分会第九届全国会员代表大会
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为研究鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白FliC 的生物学特性,利用PCR 方法扩增鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白FliC 基因,构建重组表达质粒pET-32a-FliC,经大肠杆菌Rosetta(DE3)表达、镍离子亲和层析法纯化后用SDS-PAGE 和Western-blot 方法分析.重组蛋白与巨噬细胞RAW264.7 共孵育,ELISA 和CCK-8 法分别检测巨噬细胞细胞因子和巨噬细胞增殖情况.重组蛋白免疫小鼠后不同时间点检测血清抗体效价和细胞因子水平.结果显示,鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白FliC 在大肠杆菌中呈可溶性表达,且可获得纯度较高的重组鞭毛蛋白.50ng/mL 和500 ng/mL 重组鞭毛蛋白可刺激巨噬细胞增殖,同时促进巨噬细胞分泌IL-1、IL-4、IL-6、IL-8、IFN-γ和TNF-α.重组蛋白免疫小鼠后效价在第3 周达到1∶128 000,同时小鼠血清细胞因子的分泌量呈倒V 型变化.研究结果为后续进一步研究FliC 蛋白在细菌感染、侵袭和免疫方面的作用研究提供了参考数据.
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