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目的: 人角膜在不同浓度的1-乙基-（3-二甲基氨丙基）-碳化二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)溶液中进行交联，应用紫外分光光度计评估角膜透明度改变、微材料力学测试系统测定角膜生物力学性质变化及电子显微镜观察胶原纤维形态的改变，评估EDC/NHS对角膜透明度、胶原纤维形态和生物力学特性的影响。 方法: 本研究所用角膜材料均来自供体人眼，角膜在深低温甘油保存的角膜在常温下复温30分钟后，随机分为三组，每组5只角膜，浸泡入相应溶液中，Ⅰ组EDC/NHS浓度为1％/0.5％(CXL-1)，Ⅱ组EDC/NHS浓度为10％/5％(CXL-10)，Ⅲ组不含EDC/NHS的基础液(GNC)，新鲜角膜材料作为部分实验的对照组，室温连续浸泡12小时后，在乳酸林格氏液中洗涤2次，每次15分钟，然后比较各组间各种参数的差异，包括厚度、透光率、交联度、细胞毒性、生物力学、胶原纤维形态等差别。 结果: 1.离体实验研究中，角膜厚度测量结果显示各组平均角膜中央厚度:CXL-1，663.8±34.7μm; CXL-10,641.0±28.7μm; GNC,759.6±23.4μm;其中，GNC与其他两组比较均存在统计学差异(p＜0.05)，而CXL-1和CXL-10两组间厚度比较不存在统计学差异(p=0.29) 2.各组平均可见光透光率分别为CXL-1，80.6±2.08％; CXL-10，81.9±2.07％; GNC，61.3±7.38％; GNC与其他两组比较均存在统计学差异(p＜0.05)，而CXL-1和CXL-10两组间平均可见光透光率不存在统计学差异(p=0.356) 3.角膜交联度通过TNBS法测定的结果显示，CXL-1组交联度为35.36±1.54％，CXL-10组交联度为51.34±1.22％，CXL-1和CXL-10两组间存在统计学差异(p＜0.05) 4.组织相容性通过细胞毒实验来测定，三组结果显示与空白对照组差异不明显，提示三组材料无细胞毒性。 5.角膜生物力学测量应力/应变曲线图显示随着应力的增加，交联组应变量缓慢且非常小，到达一定程度后甚至发生断裂。GNC在应力为2.0MPa时，CXL-1组角膜应变量为0.110mm/mm，GNC组角膜应变量为0.139mm/mmCXL-10组角膜已经发生了断裂，因此CXL-10是最硬的，且韧度最差，CXL-1较GNC组生物力学特性增强，柔软度适中。 6.通过扫面电子显微镜和透射电子显微镜观察，新鲜角膜材料的胶原纤维直径较甘油保存和交联组均要大，且排列紧密，胶原纤维走行规则连续，几乎没有交错; CXL-1组胶原纤维密度增高，胶原纤维走行较规则，胶原纤维排列较均匀;CXL-10组胶原纤维密度较CXL-1组高，胶原纤维排列较均匀;甘油组胶原纤维密度降低，排列较为紊乱，胶原纤维间可见少量丝状高密度影，提示胶原纤维存在变性，并可发现胶原纤维缺失区。 结论: 1.不同浓度的EDC/NHS对甘油保存的供体角膜材料的光学性能、物理性质及胶原纤维形态存在影响。 2.EDC/NHS浓度为1％/0.5％，可以使角膜增强角膜在复水过程中的抗水肿能力，其透明度、厚度和柔软度均较理想。 3.结合甘油保存角膜和交联后甘油保存角膜在复水过程中角膜胶原纤维变化，包括胶原纤维的直径、走行、排列方式，EDC交联可以改善深低温甘油保存角膜在复水过程中吸水肿胀的问题，该方法费用低廉、操作简单，相对于角膜材料缺乏的国家，具有重要意义。但此方法还不够完善，其临床疗效及可能存在的副作用尚需进一步的研究。