【摘 要】
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目的 构建pCDH-Myc-UBR5重组质粒，并探究泛素蛋白连接酶E3组分N-识别蛋白5（UBR5）在调控血管生成方面的生物学功能。方法 以人乳腺癌细胞（MCF7）的互补DNA（cDNA）为模板，将UBR5基因编码区序列分为前后两段，经聚合酶链式反应（PCR）扩增。两段扩增序列插入到真核表达载体pCDH-Myc中，通过菌液PCR及DNA测序鉴定插入片段。将重组质粒瞬时转染至人胚胎肾细胞（HEK29
【基金项目】
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国家自然科学基金（82070434）； 北京市科技新星计划（Z191100001119020）～～；
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目的 构建pCDH-Myc-UBR5重组质粒，并探究泛素蛋白连接酶E3组分N-识别蛋白5（UBR5）在调控血管生成方面的生物学功能。方法 以人乳腺癌细胞（MCF7）的互补DNA（cDNA）为模板，将UBR5基因编码区序列分为前后两段，经聚合酶链式反应（PCR）扩增。两段扩增序列插入到真核表达载体pCDH-Myc中，通过菌液PCR及DNA测序鉴定插入片段。将重组质粒瞬时转染至人胚胎肾细胞（HEK293T）中，通过蛋白质印迹法检测Myc-UBR5蛋白的表达。为了验证UBR5蛋白的功能，通过免疫共沉淀实验检测UBR5与先天性角化不良1（DKC1）蛋白的相互作用。结果 成功构建pCDH-Myc-UBR5重组质粒。经菌液PCR及DNA测序证实UBR5扩增序列成功插入到pCDH-Myc载体中，并在HEK293T中表达。免疫共沉淀实验发现UBR5与DKC1存在相互作用。结论 通过分子克隆技术可成功构建pCDH-Myc-UBR5质粒并在细胞中正确表达。UBR5与血管生成调控蛋白DKC1存在相互作用。
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