【摘 要】
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目的 通过cDNA代表性差异分析法(cDNA-representational difference analysis,RDA)来寻找银屑病皮损组织中特异表达的基因片段。方法 用改良的异硫氰酸胍一步法提取银屑病皮损及正常皮肤组织的tRNA及mRNA,逆转录后采用差减杂交及选择性PCR扩增相结合为基础的RDA方法,使含有特定接头的银屑病组cDNA片段得到大量扩增。结果 通过质量分数1%琼脂糖凝胶电泳
【机 构】
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第二军医大学附属长海医院皮肤科,上海200433,第二军医大学附属长海医院皮肤科,上海200433,第二军医大学附属长海医院皮肤科,上海200433,复旦大学遗传工程国家重点实验室,复旦大学遗传工程国
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目的 通过cDNA代表性差异分析法(cDNA-representational difference analysis,RDA)来寻找银屑病皮损组织中特异表达的基因片段。
方法 用改良的异硫氰酸胍一步法提取银屑病皮损及正常皮肤组织的tRNA及mRNA,逆转录后采用差减杂交及选择性PCR扩增相结合为基础的RDA方法,使含有特定接头的银屑病组cDNA片段得到大量扩增。
结果 通过质量分数1%琼脂糖凝胶电泳及放射自显影分析,两组皮肤组织mRNA质量及丰度都比较高;经过两次PCR扩增后在琼脂糖凝胶电泳上可见5条清晰条带,其大小范围在100～600bp之间。
结论 本实验表明银屑病皮损组织中可能存在与正常皮肤组织差异表达的基因;cDNA-RDA方法对于识别差异表达的基因具有高效性。
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