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目的 构建Grp94靶向RNA干扰质粒载体,观察其对人类胃癌细胞株SGC-7901 Grp94基因表达的抑制作用.方法 从GenBank中选取人类Grp94基因序列,采用siRNA Target Designer-Version 1.51设计软件设计1对Grp94基因发卡寡核苷酸,序列符合siRNA表达载体siSTRIKETM U6的要求并与psiSTRIKETM质粒载体连接,构建受控于人RNA聚合酶Ⅲ启动子U6的真核表达载体.采用LipofectamneTM 2000转染试剂进行转染,将重组质粒导入人类胃癌细胞株SGC-7901内,分别在转染前、转染后24、48和72 h通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot及免疫荧光技术检测Grp94 mRNA及蛋白水平的表达情况.结果 成功构建RNA干扰质粒载体,靶向Grp94干扰质粒载体命名为psiSTRIKETM/Grp94,将上述质粒转染到人类胃癌细胞株后,观察到psiSTRIKETM/Grp94能够明显下调Grp94 mRNA及蛋白水平的表达,并随着时间推移稳定存在.结论 构建的RNA干扰真核表达载体psiSTRIKETM/Grp94能明显抑制Grp94 mRNA及蛋白的表达,提示通过降低胃癌细胞中Grp94的表达,可能抑制或辅助抑制胃癌细胞的生长的作用。